[发明专利]用于检测禽流感病毒N9亚型的RT-PCR引物对、试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测禽流感病毒N9亚型的引物对，其特征在于，一条引物包含如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，另一条引物包含如SEQ ID NO：6所示核苷酸序列。

2.包含权利要求1所述引物对的组合物。

3.一种用于检测禽流感病毒N9亚型的试剂盒，其特征在于，包含权利要求2所述的组合物。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，还包含RT-PCR反应液、酶混合液，所述的RT-PCR反应液由权利要求1所述的引物对、反应缓冲液和dNTPs混合在一起；所述酶混合液由RNA酶抑制剂、反转录酶和Taq DNA聚合酶按3:2:10混合在一起。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其还包含一种X液，所述的X液为一对引物，所述引物对可对阳性对照的RNA进行扩增，扩增的片段长度与禽流感病毒N9亚型所检测的目的基因长度相同。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中X液的一条引物包含如SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，另一条引物包含如SEQ ID NO：8所示核苷酸序列。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其还包含阳性对照、阴性对照、RNA提取试剂和电泳检测试剂，所述阳性对照为新城疫耐热保护剂活疫苗（LaSota株），经灭活后得到；所述阴性对照为SPF鸡胚尿囊液，经灭活后得到。

8.权利要求1所述的引物对在制备检测禽流感病毒N9亚型的试剂中的用途。

9.一种检测禽流感病毒N9亚型的方法，包括使用权利要求1所述的引物对。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）使用权利要求1所述的引物对形成RT-PCR反应液，并与酶混合液形成扩增反应体系；

（2）将步骤（1）的扩增反应体系在PCR扩增仪上进行PCR反应。

（3）将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，观察检查结果。