[发明专利]一种枳实药材指纹图谱、其建立方法及用途

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种枳实药材指纹图谱、其建立方法及用途。具体地，本发明涉及一种枳实药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱及其建立方法，以及枳实药材HPLC指纹图谱和/或标准指纹图谱在鉴别枳实药材中的用途。本发明还涉及一种鉴别枳实药材质量（是否合格）的方法。

背景技术

中药指纹图谱是指某种（或某产地）中药材或中成药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材或中成药药物特性的共有峰的图谱。指纹图谱从中医整体观念和中药药效来自多种化学物质综合作用的观点出发，能够建立比较客观、整体和多指标的综合评价体系，并通过图谱的整体特征，能够比较全面地反映出中药所含化学成分的种类与数量，是一种综合的、可量化的质量控制手段。与测定单一组分相比，它的优势在于能够提供更丰富、有效的质和量的信息，因此指纹图谱技术可以更客观、科学、合理地进行中药质量控制。中药指纹图谱能较为宏观和综合地反映中药的内在质量已被国内外研究者所认可。

枳实为常用中药药材，古有“橘生淮南则为橘，生于淮北则为枳”的名句，其在经典名方中多有使用，《伤寒杂病论》中用枳实之方有十七，如枳实薤白桂枝汤、大柴胡汤等。枳实为芸香科植物酸橙Citrus aruantium L.及其栽培变种或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果，具有破气消积，化痰散痞的功效。

枳实中的主要活性成分为挥发油、黄酮类化合物和少量生物碱类化合物。其中，挥发油类主要成分为右旋柠檬烯、枸橼酸等；生物碱类成分主要为辛弗林、N-甲基酪胺；黄酮类成分主要为柚皮苷、新橙皮苷及橙皮苷（张红，孙明江，王凌.枳实的化学成分及药理作用研究进展.中药材，2009，32(11):1787-1789）。

2010版药典规定，以辛弗林作为枳实质量控制的指标（国家药典委员会编，中华人民共和国药典2010年版，北京：化学工业出版社，2010，一部：230）。这种采用单一指标进行中药质量控制的方法不能全面反映中药内在化学成分的种类和数量，进而反映中药质量，此外，测定辛弗林含量的方法相对比较复杂。因此，目前亟需新的有效检测和鉴定枳实药材且操作相对简便的方法。

发明内容

本发明人经过深入的研究和创造性的劳动，得到了一种枳实药材HPLC指纹图谱的建立方法并且得到了枳实药材HPLC标准指纹图谱。本发明人惊奇地发现，该建立方法和枳实药材HPLC标准指纹图谱能够用于鉴定或者鉴别枳实药材质量是否合格，具有较高的可信度和极高的灵敏度。由此提供了下述发明：

本发明的一个方面涉及一种枳实药材HPLC指纹图谱的建立方法，包括下述步骤：

（1）枳实供试品（例如供试品溶液）的制备，和

（2）高效液相色谱分析方法。

根据本发明任一项所述的建立方法，其中，所述步骤（1）包括：

1）称取枳实药材，加入5－15倍量（ml/g）的蒸馏水回流提取1－5次，每次1－5h；

2）将提取物过滤，合并滤液；将滤液浓缩，得到浓缩液；

3）向浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇含量为50%－90%，均匀搅拌，静置1－24小时，离心，得到沉淀；

4）用50%－90%乙醇洗涤沉淀，离心，合并上清，浓缩除醇，将得到的提取液冷冻干燥，得到供试品；

优选地，还包括：

5）精密称取供试品，用50%－90%的甲醇定容，以微孔滤膜过滤，得到枳实供试品溶液。

根据本发明任一项所述的建立方法，其特征在于如下的A－H项中的任意一项或者多项：

A.步骤1）中，加入8－12倍量（例如8、9、10、11、12）的蒸馏水；

B.步骤1）中，回流提取2－4次（例如2、3或4次）；

C.步骤1）中，回流提取2－4小时（例如2、3或4小时）；

D.步骤3）中，至乙醇含量为60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

E.步骤3）中，静置时间为5－15小时（例如8－12小时、8、9、10、11或12小时）；

F.步骤4）中，乙醇浓度为60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

G.步骤3）和4）中，所述离心独立地为5－50min，1500－5000rpm（例如为15－30min，2000－3000rpm或者25min，2500rpm）；和