[发明专利]一种枳实药材指纹图谱、其建立方法及用途

权利要求书

1.一种枳实药材HPLC指纹图谱的建立方法，包括下述步骤：

（1）枳实供试品的制备，和

（2）高效液相色谱分析方法。

2.根据权利要求1所述的建立方法，其中，所述步骤（1）包括：

1）称取枳实药材，加入5－15倍量（ml/g）的蒸馏水回流提取1－5次，每次1－5h；

2）将提取物过滤，合并滤液；将滤液浓缩，得到浓缩液；

3）向浓缩液中加入无水乙醇，至乙醇含量为50%－90%，均匀搅拌，静置1－24小时，离心，得到沉淀；

4）用50%－90%乙醇洗涤沉淀，离心，合并上清，浓缩除醇，将得到的提取液冷冻干燥，得到供试品；

优选地，还包括：

5）精密称取供试品，用50%－90%的甲醇定容，以微孔滤膜过滤，得到枳实供试品溶液。

3.根据权利要求2所述的建立方法，其特征在于如下的A－H项中的任意一项或者多项：

A.步骤1）中，加入8－12倍量（例如8、9、10、11、12）的蒸馏水；

B.步骤1）中，回流提取2－4次（例如2、3或4次）；

C.步骤1）中，回流提取2－4小时（例如2、3或4小时）；

D.步骤3）中，至乙醇含量为60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

E.步骤3）中，静置时间为5－15小时（例如8－12小时、8、9、10、11或12小时）；

F.步骤4）中，乙醇浓度为60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）；

G.步骤3）和4）中，所述离心独立地为5－50min，1500－5000rpm（例如为15－30min，2000－300rpm或者25min，2500rpm）；和

H.步骤5）中，甲醇浓度为60%－80%（例如65%－75%、60%、65%、70%、75%或80%）。

4.根据权利要求1所述的建立方法，其中，所述步骤（1）包括：

（1－1）称取枳实药材10g，加入100mL蒸馏水回流提取2次，每次2h，过滤，合并两次滤液；适当浓缩后，加入无水乙醇，至乙醇含量为70%，均匀搅拌，静置过夜，25min，2500rpm离心，用70%乙醇洗涤沉淀，25min，2500rpm离心，合并上清，浓缩除醇，将得到的提取液冷冻干燥，得到供试品；

优选地，还包括：

（1－2）精密称取枳实中等极性部位样品0.0200g，用50%甲醇定容至10mL容量瓶中，以0.45μm微孔滤膜过滤，得到枳实供试品溶液。

5.根据权利要求1所述的建立方法，其中，所述步骤（2）包括：

色谱柱填料为Agilent TC-C₁₈；流动相为含0.1%甲酸的乙腈-水梯度洗脱；梯度洗脱条件为：0min→20min→45min→60min→75min→77min，乙腈3%→20%→20%→30%→80%→100%；流速1.0mL/min；检测波长为240－310nm；柱温30℃；进样量为2－20μL；得到枳实药材指纹图谱；

具体地，所述步骤（2）包括：

色谱柱填料为Agilent TC-C₁₈，规格为250mm×4.6mm，5μm；流动相为含0.1%甲酸的乙腈-水梯度洗脱；梯度洗脱条件为：0min→20min→45min→60min→75min→77min，乙腈3%→20%→20%→30%→80%→100%；流速1.0mL/min；检测波长为240-310nm；柱温30℃；进样量为20μL；得到枳实药材指纹图谱。

6.一种枳实药材HPLC指纹图谱，其由权利要求1至5中任一项所述的建立方法得到。