[发明专利]一种阳离子交换层析柱的清洗方法

说明书

本发明涉及一种阳离子交换层析柱的清洗方法，所述方法包括如下步骤：（1）将使用过的阳离子交换层析柱，用水清洗，再用NaOH溶液（2）最后用平衡缓冲液(pH5.0‑8)冲柱子，接收清洗液。本发明还包括步骤（3）和（4）的验证步骤，具体如下：（3）取清洗液，滴磷酸，观察有无沉淀产生，如无沉淀，用总有机碳分析仪测定清洗液，测定结果低于500ppm，则表示清洗合格。（4）若有沉淀产生，须用水将步骤2得到清洗液稀释直至滴加磷酸后无沉淀出现后，将稀释后的清洗液用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果乘以稀释倍数获得的数据低于500ppm，则表示清洗合格。

技术领域

本发明涉及层析柱的清洗方法，特别涉及一种阳离子交换层析柱的清洗方法。

背景技术

在生物制药领域，阳离子交换层析柱被广泛应用。在阳离子交换层析柱使用后，填料中会有一些残留物质，可能会对下次使用造成污染，引入外来污染物，比如会对下一次使用引入内毒素或者将上一次没有清洗干净的蛋白引入到下次产物中。

现有清洗方法主要用水浸泡冲洗，或用缓冲溶液，酸，碱等溶液进行浸泡冲洗，但因没有适当的检测方法对清洗过的填料进行检测，对清洗效果无法保障。为保证每次使用后的阳离子交换层析柱清洗干净，不会对下一次使用造成污染，需要建立规范的阳离子交换层析柱的清洗流程。

本发明经过研究，找到一种简单易行，适合工业化的清洗方法，即通过三步清洗法，可以保证内毒素和总有机碳清洗合格。本发明通过固定并优化的清洗方法对阳离子交换层析柱进行清洗，使得阳离子交换层析柱清洗效果得到了保障，去除了阳离子交换层析内的内毒素，微生物以及上一次使用残留的蛋白,确保了总有机碳检验合格。

发明内容

本发明提供了一种阳离子交换层析柱的清洗方法，所述清洗是指对使用过或将要使用的不洁填料进行清洗，清洗合格后进行下一次的柱层析。

本发明所述阳离子交换层析柱，其填料为任何一种具有阳离子交换层析功能的填料，优选：SP Sepharose Fast Flow，S Sepharose Fast Flow最优选的为SP SepharoseFast Flow。

上述填料均可以通过现有技术制备，也可通过购买得到。

本发明提供一种阳离子交换层析柱的清洗方法，包括如下步骤：

步骤1，

将不洁的阳离子交换层析柱填料，用水清洗，再用NaOH水溶液清洗；

步骤2，

用平衡缓冲液(pH5.0-8)清洗。

根据需要，本发明还包括步骤3和步骤4的步骤，如下：

步骤3，

取步骤2得到的清洗液，滴磷酸，观察有无沉淀产生，如无沉淀，用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果低于500ppm，则表示清洗合格。

步骤4，

若有沉淀产生，须用水将清洗液稀释直至滴加磷酸后无沉淀出现后，将稀释后的清洗液用总有机碳分析仪测定该清洗液，测定结果乘以稀释倍数获得的数据低于500ppm，则表示清洗合格

本发明所述的阳离子交换层析柱，优选填料为SP Sepharose Fast Flow；柱型号：BPG100、BPG500、XK2、XK20、XK50、XK20中一种，优选BPG100。所述的柱子径高比：（0.5-1）：1，优选（0.5-0.7）：1。最优选柱子高15cm以内，直径：10cm。

本发明的清洗方法，可以将填料从层析柱上取下后在容器中清洗，也可装在层析柱中清洗，优选装在层析柱中清洗，其中清洗液流速为120-150ml/min，优选120ml/min。