[发明专利]一种磁性纳米颗粒对核酸的提取方法和应用

权利要求书

1.一种磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，包括如下步骤：

步骤一，使用裂解缓冲液裂解样品，得到样品裂解液，其中，裂解缓冲液的用量和样品的用量的比例关系为每40μL的裂解缓冲液对应10⁶细胞数量的样品；

步骤二，将5μL-100μL的磁性纳米颗粒的溶液加入到20μL-100μL所得的样品裂解液中，再加入20μL-500μL的结合缓冲液，混匀，转移入离心管中，放置在磁力架上磁性分离10秒-50秒，待磁性纳米颗粒吸附分离核酸后，移除液体，得到吸附了核酸的磁性纳米颗粒；

步骤三，向吸附了核酸的磁性纳米颗粒中加入50μL-200μL的洗涤缓冲液，混匀，放置在磁力架上磁性分离10秒-50秒，待至少一次的洗涤后，移除液体；

步骤四，向洗涤过后的吸附了核酸的磁性纳米颗粒中加入20μL-50μL的洗脱缓冲液，混匀，放置在磁力架上磁性分离10秒-50秒，待充分洗脱后收集洗脱液，核酸即在所得洗脱液中。

2.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述裂解缓冲液包含如下组分：十二烷基硫酸钠0.05wt%-0.5wt％，异硫氰酸胍0.1M-4M，蛋白酶k 10μg/mL-800μg/mL，EDTA 1mmol/L-10mmol/L，NaCl 10mmol/L-150mmol/L。

3.根据权利要求2所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述裂解缓冲液包含如下组分：十二烷基硫酸钠0.05wt％，异硫氰酸胍0.5M，蛋白酶k 800μg/mL，EDTA 10mmol/L，NaCl 150mmol/L。

4.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述结合缓冲液包含如下组分：NaCl 0.5M-5M，异硫氰酸胍0.01M-4M，磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液调整结合缓冲液pH为2.2-6。

5.根据权利要求4所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述结合缓冲液包含如下组分：NaCl 3M，异硫氰酸胍0.05M，磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液调整结合缓冲液的pH为4。

6.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述洗涤缓冲液包含如下组分：NaCl 0.5M-5M，异硫氰酸胍0.05M-0.5 M，乙醇10v％-70v％，磷酸缓冲液调整洗涤缓冲液pH为2.2-6。

7.根据权利要求6所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述洗涤缓冲液包含如下组分：NaCl 1M，异硫氰酸胍0.05M，乙醇20v％，磷酸缓冲液调整洗涤缓冲液pH为5。

8.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述洗脱缓冲液为pH8.0-10.0的Tris-盐酸缓冲液，优选的，所述洗脱缓冲液为pH10.0的Tris-盐酸缓冲液。

9.根据权利要求1所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法，其特征在于：所述磁性纳米颗粒为纳米磁珠，其直径为100nm-30μm，其表面修饰基团包括羧基、氨基。

10.一种权利要求1-9任一项所述的磁性纳米颗粒对核酸的提取方法的应用，用于提取miRNA，或用于提取RNA或DNA。