[发明专利]一种基因组DNA提取方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基因组DNA提取试剂盒，其特征在于，包括溶液A、溶液B、溶液C、溶液D和纯化柱；

溶液A：10mM-50mM Tris-HCl，10mM-50mM EDTA，1%-10%w/v SDS，2M-4M NaCl，0.5%-2%v/vβ-巯基乙醇，pH7.5-8.5；

溶液B：2.5-6M的盐酸胍或异硫氰酸胍，20%-50%v/v异丙醇或是无水乙醇，5mM-20mM EDTA，pH4.5-6.5；

溶液C：70%-80%v/v的无水乙醇，pH4.5-6.5；

溶液D：5-50μg/mL的RNA酶水溶液，用1M NaOH溶液调pH至7.0-8.5。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括研磨器，该研磨器可以为电动组织研磨器或者小型的手提电钻其转速800-12000rpm，配有长度为40-80mm，直径3-7mm的锥形研磨杵。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述研磨器的转速1500-8000rpm、并配有长度70mm，直径5mm的锥形研磨杵。

4.根据权利要求1或2或3所述的试剂盒，其特征在于，

溶液A：50mM Tris-HCl、50mM EDTA、3%SDS、2M NaCl、1%的β-巯基乙醇，pH8.0；

溶液B：4M的盐酸胍、20%异丙醇、10mM EDTA、pH5.0的0.2M的乙酸-乙酸钠缓冲液；

溶液C：70%的无水乙醇、pH5.0的0.2M的乙酸-乙酸钠缓冲液；

溶液D：20μg/mL的RNA酶水溶液，用1mol/L NaOH溶液将pH调到8.0。

5.一种基因组DNA提取方法，其特征在于，利用权利要求1～4任意一项所述的试剂盒进行提取，具体包含以下步骤：

（1）取1.5mL的锥底离心管，加入0.1mg-100mg组织样本或者10⁶-10⁹细胞样本与50μL-100μL的溶液A混合；开动研磨器研磨样本30s-5min，向研磨好的样本中加入溶液A使样品终体积为150μL；

（2）漩涡振荡器震荡30s，使菌体尽量分散；离心转速10000g-12000g，时间5min；取上清100μL至一离心管中，加入300μL-600μL的溶液B，上下颠倒混匀；再将混合液加入纯化柱中，10000g-12000g，离心30s-1min；弃收集管中的液体，向纯化柱中加入300μL-600μL的溶液B，10000g-12000g，离心30s-1min；

（3）弃收集管中的液体，向纯化柱中加入500μL-700μL的溶液C，10000g-12000g，离心30s-1min；弃收集管中的液体，向纯化柱中加入500μL-700μL的溶液C，10000g-12000g，离心30s-1min；弃收集管中的液体，10000g-12000g，离心2-5min；

（4）将纯化柱转移到另一离心管中，加入30-50μL的溶液D，37℃放置5min；10000g-12000g，离心1-2min；即得到提取的基因组DNA溶液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细胞样本为哺乳动物细胞、细菌、酵母菌、血液或骨髓；所述细胞样品还经如下预处理：将细胞样品在转速≥5000rpm的离心机中离心5min收集细胞。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述组织样本为动植物组织或者大型真菌组织；该组织样本还经剪碎或者磨碎的预处理。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述组织样本为丝状真菌，对于生长在固体培养基上的菌丝用牙签或者移液器枪头挑取；对于生长在液体培养基中菌丝用转速≥10000rpm的离心机中离心10min或者是过滤收集菌丝。

9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述组织样本为真菌孢子悬液，用转速≥10000rpm的离心机中离心10min收集孢子或者是使用过滤的方式收集孢子。