[发明专利]一种从犊牛血液中提取转移因子的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，尤其涉及一种从犊牛血液中提取转移因子的方法。

背景技术

转移因子是一种含有多种氨基酸的低分子多肽类物质，具有无热源、无抗原性、无毒副作用以及无种属差异等优点，是一种新型安全的免疫制剂。研究表明，转移因子在增强机体免疫（增强细胞免疫、体液免疫、诱导启动干扰素），促进机体生长发育等方面有着显著的效果，以其为活性成分制成的药物具有使用剂量小、起效快、药效持续时间长等优点，从而成为现有医药技术领域研究的热点之一。

转移因子主要存在于动物的白细胞中，通常以富含白细胞的脾、淋巴结等器官和组织及外周血液T细胞为原料提取，如专利CN 101757029 A公开了一种从牛脾脏中提取转移因子的方法；专利CN 103027927 A公开了一种蛋鸡脾脏转移因子的生产工艺；专利CN 1 02198155 A公开了一种猪脾转移因子注射液的生产方法。而且，目前有关转移因子提取方法的报道也很多，如专利CN 1654477A公开了一种制备转移因子工艺方法-加热法；专利CN 101838324 A公开了一种转移因子制备的新工艺。

然而，上述的转移因子提取的工艺大都采用了反复冻融的方法，存在费时费工、成本高的缺点。虽然上述专利CN 1654477A采用加热法提取转移因子，节省了反复冻融的步骤，但存在温度难以控制的缺陷，而且加热后对活性蛋白以及转移因子造成了不可逆的失活损害，导致分离时蛋白成分和转移因子分离不彻底，所得产品杂质大的缺点；上述专利CN 101838324 A采用超声裂解的方法提取转移因子，也克服了反复冻融的缺陷，但超声方法对人体伤害大，不宜大规模进行。

针对传统方法中存在的反复冻融以及上述的加热法、超声裂解法存在的缺陷，本发明人经过大量实验总结，提出了一种操作步骤简单、产品易分离、产量高、转移因子活性高的提取工艺，并采用本工艺从犊牛血液中提取转移因子，具有较高的实用性并可进行大规模生产，经检索，尚未有关报道。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种从犊牛血液中提取转移因子的方法，采用冷冻乙醇低温匀浆处理，再经冰水浴以及低温过滤工艺，既达到防止提取的转移因子失活的目的，又达到降低成本、减少工艺步骤的目的。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种从犊牛血液中提取转移因子的方法，其特征在于：本发明工艺的具体步骤如下：

1）原料预处理：向采集的犊牛血液中添加肝素钠，并在低温条件下放置；

2）匀浆：经预处理的原料中加入相当于其1倍体积的体积分数为80%的冷冻乙醇及3倍体积的体积分数为40%的冷冻乙醇，然后进行高速匀浆3min；

3）酸碱度调节：将经步骤2）处理的匀浆液进行酸碱度调节，具体为调节其pH值在5.0～5.1范围内；

4）离心分离：将已调节pH值的匀浆液在冰浴中放置30～60min后，在0～4℃条件下离心20min，然后取其上清液，加等体积的去离子水冷冻干燥，即可得到干燥的提取物；

5）超滤：将干燥的提取物溶解于去离子水中，按每克提取物加2ml去离子水的比例配制成均匀的溶液，然后用超滤膜进行超滤，超滤后得到的TF溶液再经过冷冻干燥，即可得到TF冻干粉（粗品）；

6）纯化：上述步骤所得的粗品经过琼脂糖凝胶柱sephadex G50色谱进一步纯化分离，即可得到纯度在98%以上的转移因子提取物。

进一步，步骤1）中所述的原料预处理工序中，肝素钠的添加量为12.5U/mL血液。

进一步，步骤1）中所述的原料预处理工序中，低温放置时间为30～60min。

进一步，步骤1）中所述的原料预处理工序中，所述的低温温度为-20～-10℃。

进一步，步骤4）中所述的离心分离工序中，离心机的转速为2300～2500rpm/min。

进一步，步骤5）中所述的超滤膜是孔径为0.02um的中空纤维膜。

与现有转移因子提取方法相比，本发明的有益效果在于：

1）本发明在提取过程中，所有工序过程均是在低温条件下进行的，减少反复冻融的步骤，降低成本，提高经济效益；

2）本发明工艺采用恒低温条件，保持转移因子活性，避免因温度变化引起失活的现象；

3）采用本发明提取方法从犊牛血液中提取转移因子，较动物脾脏中提取，具有原料易得、材料成本低的优点。

具体实施方式

下面结合具体实例对本发明的技术方案作进一步说明，但不限制本发明的技术范围。