[发明专利]一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物检验领域，涉及一种药物原料盐酸溴己新细菌内毒素检测方法，也就是检测盐酸溴己新原料中细菌内毒素含量的方法。

背景技术

盐酸溴己新是一种粘痰溶解剂，可直接作用于支气管腺体，促使粘液分泌细胞的溶酶体释出，使痰中的粘多糖纤维分化裂解，使痰液稀释，易于咳出。临床上主要用于急性及慢性支气管炎、哮喘、支气管扩张、肺气肿，尤适用于白色粘痰咳出困难者及因痰液广泛阻塞小支气管引起的危重急症等。而细菌内毒素是一种能引起人体发热、白细胞减少等一系列生理反应的物质。盐酸溴己新作为注射剂药物的原料时，应进行细菌内毒素含量的检查控制。目前国内外没有针对盐酸溴己新原料进行细菌内毒素检查的文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种灵敏、可靠的方法，能快速检测出盐酸溴己新原料中细菌内毒素的含量。

本发明的盐酸溴己新原料的细菌内毒素检查方法是：取盐酸溴己新，用DMSO(二甲基亚砜)溶解、制备成浓度为10mg／ml的盐酸溴己新溶液，再用细菌内毒素检查用水分别稀释至200、400、800、1600和3200倍，将此系列浓度溶液记为A。同时在上述试验液中加入细菌内毒素标准溶液，使每一浓度的实验液中均含有2λ(λ为所用鲎试剂的标示灵敏度)浓度的细菌内毒素，记此系列溶液为B。取灵敏度为0.25EU／ml的两个不同厂家的鲎试剂，分别与上述A和B进行反应，每一浓度重复两管，并设阳性和阴性对照，进行预干扰试验，找出最大稀释倍数。再按找出的最大稀释倍数，制备盐酸溴己新供试液。按《中华人民共和国药典》二部附录中的“细菌内毒素检查方法”，与两个不同厂家的灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂进行干扰实验，最终确认是否存在干扰因素的影响，确认细菌内毒素的限度值；将盐酸溴己新溶液用DMSO(二甲基亚砜)稀释1600倍，作为供试品溶液，同时取上述供试品溶液，加入细菌内毒素标准溶液，使其含有2λ(λ为所用鲎试剂的标示灵敏度)浓度的细菌内毒素，作为阳性对照，分别加入灵敏度为0.25EU／ml的鲎试剂，按照《中华人民共和国药典》二部附录细菌内毒素检查法规定，进行盐酸溴己新原料细菌内毒素检查，根据鲎试剂的反应结果，判断内毒素是否符合规定。

本发明有如下优点：

1、可以快速、准确地检测出盐酸溴己新原料中的细菌内毒素的含量。

2、通过预干扰试验确定最大稀释倍数，再进行干扰试验可以降低检验成本。

具体实施方式

(1)、限值的确定

公式：L=K／M

根据盐酸溴己新说明书：“肌肉注射或静脉注射。一次4mg，一日8～12mg。静脉注射时用0.9％氯化钠注射液或5％葡萄糖注射液稀释后使用。”确定人用最大剂量为12mg／h。K：为人每公斤体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/kg／hr表示，注射剂K=5EU／kg／hr。

L=K/M=5EU/kg/hr12mg/60kg/hr=25EU/mg]]>

考虑到在实际使用时，盐酸溴己新会被溶解到大输液中，而大输液本身也含有内毒素，为保证联合用药的安全，将盐酸溴己新内毒素限值进一步严格，定为10EU／mg。

(2)、试剂

a、盐酸溴己新原料药

中国医学科学院药物研究所提供

规格：1g/瓶  批号：100401、100402、100403

b、鲎试剂

湛江安度斯生物有限公司

规格：0.1ml   批号：1005062  灵敏度：0.25EU／ml

湛江安度斯生物有限公司

规格：0.1ml   批号：0810222  灵敏度：0.06EU／ml

湛江博康海洋生物有限公司

规格：0.1ml   批号：1004131  灵敏度：0.25EU／ml