[发明专利]一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程、疫苗研制和诊断试剂等领域，具体地涉及一种编码重组人柯萨奇病毒B组蛋白的重组DNA，一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白及其应用。

背景技术

柯萨奇病毒（Coxsackievirus）是一种肠病毒（enteroviruses），分为A和B两类，是常见的经呼吸道和消化道感染人体的病毒。感染后人会出现发热、打喷嚏、咳嗽等感冒症状。妊娠期感染可引起非麻痹性脊髓灰质炎性病变，并致胎儿宫内感染和致畸。

柯萨奇病毒A组有23型病毒，B组有6型病毒。通过型特异性抗原，经中和试验，ELISA方法等可以对各型进行鉴定。

柯萨奇病毒所有的B组及A组的第9型有共同的组特异性抗原，在B组内病毒之间有交叉反应，但是A组病毒没有共同的组特异性抗原。A组某些型别的型特异性抗原可在37℃引起人类O型红细胞凝集反应。

柯萨奇B组病毒（coxsackievirusgroupB，CVB）感染自1954年在美国纽约州柯萨奇镇发生及被报道以来，除引起新生儿散发感染外，也陆续在世界的某些地区发生了多次流行。主要侵犯免疫力低下的围生儿。柯萨奇B组病毒包括柯萨奇B1，柯萨奇B2，柯萨奇B3，柯萨奇B5几种病毒。

柯萨奇B组病毒是微小RNA病毒科肠道病毒属成员，病毒性心肌炎的病例中大约有20%-25%是由柯萨奇B组病毒引起。CVB的致病机制十分复杂，病毒基因组以及病毒蛋白均在病毒致病过程中发挥重要作用。因此，对柯萨奇B组病毒的基因组、结构蛋白以及某些非结构蛋白与靶细胞内分子间相互作用生物信息的认识是阐述该病分子机制的基础。

实验室检查是本病早期和确定诊断的主要依据，主要包括病毒分离，血清学特异性抗体的检测等。但分离培养耗时长，必须在早期进行分离才能提高病原体的阳性检出率。

发明内容

本发明的目的是提供一种编码重组人柯萨奇病毒B组蛋白的重组DNA，提供一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白，提供一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白的制备方法，提供一种检测人柯萨奇病毒B组感染的试剂盒，以及提供一种将所述重组人柯萨奇病毒B组蛋白用于检测人柯萨奇病毒B组感染的用途。

本发明提供了一种编码重组人柯萨奇病毒B组蛋白的重组DNA，该重组DNA的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。

本发明提供了一种包含所述重组DNA的人柯萨奇病毒B组蛋白的表达载体，它是将权利要求1所述的重组DNA插入到质粒pET-30a上得到的重组pET-30a-COXB质粒，其质粒图谱如附图2所示。

本发明提供了一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白，它由所述重组DNA编码，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。

本发明提供了一种重组人柯萨奇病毒B组蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1）获得具有SEQIDNO:1所示核苷酸序列的重组DNA；

2）将所述重组DNA导入质粒，构建表达载体；

3）将所得到的重组质粒导入原核宿主细胞；；

4）在有利于所述核苷酸序列表达的条件下培养所述宿主细胞，表达由所述重组DNA编码的重组人柯萨奇病毒B组蛋白；

5）回收、纯化及复性所表达的重组蛋白。

所述原核宿主细胞是大肠杆菌细胞，优选BL21（DE3）菌株。

所述质粒优选为pET-30a质粒。

上述步骤4）中的培养条件为：37℃培养3小时后（转速200r/min），加入诱导剂（终浓度为1mmol/mL），37℃诱导表达5小时（转速200r/min）。

本发明提供了一种表达重组人柯萨奇病毒B组蛋白的工程菌株，该菌株含有所述表达载体pET-30a-COXB，该工程菌株是大肠埃希氏菌EscherichiacoliYNTpET-30a-COXB，其菌种保藏号为CGMCCNo.8892，该菌株于2014年03月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101。

本发明提供了一种检测人柯萨奇病毒B组感染的试剂盒，其组分中的抗原是本发明所述的重组人柯萨奇病毒B组蛋白，用于标记所述重组人柯萨奇病毒B组蛋白的标记物选自胶体金或辣根过氧化物酶（HRP）。