[发明专利]一种液态深层发酵生产猪苓菌粉的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药用真菌的发酵工程领域，具体涉及一种液态深层发酵生产猪苓菌粉的方法。

技术背景

猪苓[Polyporus umbellatus(Pers.)Fries]是一种药用真菌。我国古文献中有许多关于猪苓的记载。《本经》记载其主痃疟、利水道。《药性论》记载其解伤寒温疫大热、发汗、主肿胀、满腹急痛。《本草求真》其文曰猪苓，凡四苓、五苓等方，并皆用此，性虽有类泽泻，同人膀胱肾经，解热除湿，行窍利水，然水消则脾必燥，水尽则气必走；泽泻虽同利水，性亦类燥，然咸性居多，尚有润存，泽虽治火，性亦损气，然润能滋阴，尚有补在。故猪必合泽泻以同用，则润燥适均，而无偏陂之患矣。《神农本草经》将猪苓列为上品，是利水渗湿的常用药。用于小便不利，水肿、泄泻、淋浊、带下等症。在20世纪70年代，日本的T Miyazaki和N Oikawa首次从猪苓菌核中提取出猪苓多糖，经临床证明是具有药理作用的有效组分。临床上猪苓多糖用于原发性肺癌、肝癌、子宫颈癌、鼻咽癌、食道癌和白血病等放化疗的辅助治疗。

目前已报道的猪苓发酵生产专利，主要有栽培生产和固体发酵生产方式(见中国专利号CN1332019C、CN101849476、CN101080989B、CN1912199B、CN100469868C和CN101080989B)。栽培猪苓存在非常不利的因素：(1)受其生物学特性的影响，菌核从萌发到成熟至少需要3年以上的时间，以至于猪苓菌核在药材市场上始终是供不应求；(2)猪苓的林地栽培还需要消耗大量木材，会破坏森林资源。固态发酵生产猪苓一般也需要较长时间(一般20d以上)，且菌丝体生长期间容易受到污染。因此亟待开发新的猪苓生产方式。液态发酵技术具有大规模连续化生产、产量高、发酵周期短、活性成分高和生产效益高等优点，较栽培和固体发酵生产具有无可比拟的优势，其必将成为猪苓的主要生产方法。然而已报道的液体发酵生产猪苓存在着发酵周期较长、需与蜜环菌共发酵或研发规模小等缺点(见中国专利号CN1332019C、CN101294139A和CN101948760)。为此本发明公开一种新的液体发酵生产猪苓菌粉的方法。

发明内容

本发明的目的是通过液体深层发酵技术，较大规模的生产出较经济、食用安全和多糖成分较高的猪苓菌粉。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种液态深层发酵生产猪苓菌丝体的方法，包括以下步骤：

(1)菌种的斜面培养：将菌种接入PDA斜面培养基中，培养温度25-28℃，培养2-4d，得到斜面菌种；

(2)种子的制备：将斜面菌种接入装有种子培养基的摇瓶中，培养温度25-28℃，转速100-150rpm，培养2-4d，获得一级摇瓶种子；将一级摇瓶种子以体积比5％移入摇瓶中进行再扩大培养，培养温度25-28℃，转速100-150rpm，培养2-4d，得到二级摇瓶菌种；

(3)发酵培养：将步骤(2)得到的适量种子转入装灭菌培养基的500L发酵罐中进行培养，培养温度25-28℃，罐压0.02-0.05Mpa，搅拌速率80-150rpm(2h搅拌5min)，通气量1∶0.8V／V·min～1∶1.5V／V·min，发酵60-80h后放罐(放罐标准为：发酵液变得粘稠，培养基菌pH降到3.0～4.0，菌丝体的浓度达到20～30g湿菌丝／100mL)；

(4)菌粉的加工：将发酵液经板框过滤后放置12-24h，在60-85℃的烘箱中烘6-12h，将菌粉经粉碎机进行粉碎，即为猪苓菌粉。

上述的猪苓菌的发酵方法，所涉及到的种子培养基配方为：葡萄糖10-20g／L，玉米粉10-20g／L，豆粕粉5-15g／L，VB₁ 10-20mg／L，KH₂PO₄1-3g／L，MgSO₄.7H₂O 0.5-1g／L，豆油0.5-1.5g／L，泡敌0.5-1g／L，其余为饮用安全水，pH5.5-6.0(用食品级NaOH调节pH)；