[发明专利]一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷A的方法

权利要求书

1.一种利用高速逆流色谱分离纯化制备哈巴俄苷和斩龙剑苷A的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

（1）将玄参药材粉碎成粗粉，加入体积分数10%-95%的乙醇溶剂中，加热至回流提取1-3次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物；

（2）哈巴俄苷、斩龙剑苷A的富集：将步骤（1）的乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶剂梯度洗脱，收集含有哈巴俄苷、斩龙剑苷A的洗脱液，减压除去溶剂，干燥、得到哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物；

（3）哈巴俄苷、斩龙剑苷A的纯化：将哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物进行高速逆流色谱分离，以体积比为1-5:5-10:1-10的溶剂A、溶剂B、溶剂C组成高速逆流溶剂体系，所述溶剂A为甲醇、乙醇、正丁醇或异丁醇，所述溶剂B为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶剂C为水，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.5～5ml/min的流速注入流动相，以波长190-380nm的紫外检测器检测，当明显有流动相流出时，取哈巴俄苷、斩龙剑苷A混合粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，根据紫外检测器光谱图的峰形分别收集对应流出液，浓缩、干燥，分别制得哈巴俄苷、斩龙剑苷A。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1）中，乙醇溶剂的体积用量以粗粉的质量计为3～10L/kg，每次回流提取的时间为30-60min，提取次数为1-3次。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（1）中，所述乙醇溶剂为体积分数50%的乙醇溶剂。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2）中，所述大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中极性的大孔吸附树脂。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于所述步骤（2）中，所述大孔吸附树脂为D101、AB-8或DM301大孔吸附树脂。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（2）中，所述梯度洗脱条件为先用2-6倍柱体积的水洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数10%-30%乙醇或甲醇的水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数30%-50%乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数40%-70%乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数60%-95%乙醇或甲醇水溶液洗脱。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中，所述溶剂A为正丁醇，所述溶剂B为乙酸乙酯。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中，所述溶剂A、溶剂Ｂ、溶剂C的体积比为1:9:10。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中，所述高速逆流溶剂体系为体积比1：9：10的正丁醇-乙酸乙酯-水体系。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述步骤（3）中，所述紫外检测器的波长为210～254nm。