[发明专利]一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种利用HPLC-ELSD测定啤酒中麦芽低聚糖的方法，属于化学分析检测领域。

背景技术

啤酒含有丰富的营养物质，被称为“液体面包”。实际上，啤酒中含量最丰富的是糖类，它们不仅提供啤酒中绝大部分的能量，而且对啤酒泡沫性能也发挥作用。而啤酒中游离糖包括单糖，二糖和多糖。单糖和高聚糖的含量相对较少，而主要成分就是低聚糖。如何能够定量地分析啤酒中麦芽低聚糖成为研究其功能性质的一个难题。

麦芽低聚糖包括麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖及麦芽八糖。目前对麦芽低聚糖的研究仅局限于定量分析麦芽三糖及以下，而对于麦芽四糖及以上并无报道。且没有一种有效检测方法能定量分析麦芽糖、麦芽三糖等低聚糖。

本发明旨在提供一种同时检测啤酒中多种麦芽低聚糖的方法，为研究啤酒酿造过程中麦芽低聚糖含量的变化对啤酒泡沫性能的影响提供帮助，同时也为生产工艺提供理论指导。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用HPLC-ELSD检测啤酒麦芽低聚糖的方法。该方法能有效对啤酒中麦芽低聚糖含量进行分析。

所述方法的具体步骤为：

（1）样品制备：取市售啤酒10.0mL，加入等体积的体积分数为10%的三氟乙酸溶液并在4℃条件下放置1小时，8000转离心10min以除去啤酒中蛋白质，转移上清液放置另一瓶中，并置于超声仪中超声处理60min以除去气泡；用0.45μm有机滤膜和C18萃取小柱过滤至透明无颗粒状态，将滤液存于样品瓶中，准备进样；

（2）样品检测：

检测装置为岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站，WatersXbridgeAmide柱的规格为：长度250毫米╳内径4.6毫米╳粒度3.5微米。

开启ELSD检测器，设置漂移管温度为50℃，载气压力为350KPa；待所设置参数平稳后将80%乙腈水溶液作为A流动相，30%乙腈水溶液作为B流动相输入到岛津LC-20AB高效液相色谱仪工作站。

采用梯度洗脱程序：0-16min，80%A-30%A；16-16.01min，30%A-80%A；16.01-30min，80%A；进样体积为10μL；流速1.0mL/min；柱温35℃。

待基线平稳后，进入工作状态。

将待测啤酒样品注入进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量为10微升，计算同一保留时间下的峰面积，代入标准曲线方程，即计算出待测啤酒样品中麦芽低聚糖的含量。

所述标准曲线方程的绘制是称取麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖标准品，用70%乙腈水定容于容量瓶中，分别制成麦芽低聚糖含量为10、100、500、10000、20000和5000微克/毫升的溶液，分别注入进入工作状态的HPLC装置的色谱柱，进样量为10微升，分别计算同一保留时间下的峰面积，以含量x为横坐标，以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线，作出标准曲线方程：y=f(x)，含量在10-5000微克/毫升范围。

所述的无水乙腈和去离子水均用0.45μm有机滤膜过滤，并放置于超声仪中超声60min。

所述乙腈和麦芽低聚糖标准品均为市售色谱纯。

本发明的检测方法中麦芽低聚糖的含量在10-5000微克/毫升的范围内与同一保留时间下的峰面积成线性关系，可利用这一规律对麦芽低聚糖的含量进行检测，且本发明采用HPLC-ELSD，即高效液相色谱-蒸发光散射检测器相结合，灵敏度高，检测快速，且不受流动相组成的干扰，因此对麦芽低聚糖检测的效果好。

附图说明

图1为本发明实施例中所使用的麦芽低聚糖标准品的高效液相色谱图，按洗脱时间从前往后，对应的洗脱峰依次是麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖及麦芽七糖。

图2为啤酒样品的高效液相色谱图；1，麦芽糖；2，麦芽三糖；3，麦芽四糖；4，麦芽五糖；5，麦芽六糖；6，麦芽七糖。

具体实施方式

实施例1测定啤酒中麦芽低聚糖含量

（1）样品制备：取市售啤酒10.0mL，加入同体积的10%（v/v）的三氟乙酸溶液并在4℃条件下放置1小时，8000转离心10min，取上清液放置另一新瓶中并置于超声仪中超声60min；用0.45μm有机滤膜和C18萃取小柱过滤，存于样品瓶中，准备进样。

（2）设置检测装置：