[发明专利]一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条

权利要求书

1.一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条，其特征在于：采用了原核表达后纯化的J亚群禽白血病病毒表面蛋白偶联免疫胶体金，其中所述的原核表达后纯化的J亚群禽白血病病毒表面蛋白为带有HIS标签的融合蛋白His-gp85，所述试纸条的制备方法如下：

根据现有的ALV-J设计特异性引物，所述的正向引物为5’-GCGGATCCATCAAGAACGGAACAACACG-3’，含BamHⅠ酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.2所示；反向引物为5’-GCGCGCAAGCTTGTCCCCACAAATCAAGAAAATA-3’,含Hind III酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.3所示；

利用上述一对引物以J亚群禽白血病病毒的DNA为模版进行PCR扩增：

PCR反应条件为：95℃5min，充分变性后进入循环体系：95℃40s，65℃1min，72℃1min，循环35次后72℃延伸10min；

扩增产物测序，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；

利用该基因片段连接pET30a载体，得到了重组载体pET30a—gp85重组质粒，使用1mmoL IPTG诱导表达得到带有HIS标签的融合蛋白His-gp85，进而利用该蛋白与胶体金偶联后涂布于硝酸纤维素膜上，制成试纸条。

2.根据权利要求1所述的试纸条，其特征在于：以NX0101的DNA为模版进行PCR扩增。

3.一种J亚群禽白血病免疫胶体金抗体检测试纸条的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

根据现有的ALV-J设计特异性引物，所述的正向引物为5’-GCGGATCCATCAAGAACGGAACAACACG-3’，含BamHⅠ酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.2所示；反向引物为5’-GCGCGCAAGCTTGTCCCCACAAATCAAGAAAATA-3’,含Hind III酶切位点，其基因序列如SEQ ID NO.3所示；

利用上述一对引物以J亚群禽白血病病毒的DNA为模版进行PCR扩增：

PCR反应条件为：95℃5min，充分变性后进入循环体系：95℃40s，65℃1min，72℃1min，循环35次后72℃延伸10min；

扩增产物测序，其基因序列如SEQ ID NO.1所示；

利用该基因片段连接pET30a载体，得到了重组载体pET30a—gp85重组质粒，使用1mmoL IPTG诱导表达得到带有HIS标签的融合蛋白His-gp85，进而利用该蛋白与胶体金偶联后涂布于硝酸纤维素膜上，制成试纸条；

所述的扩增模板DNA为NX0101的DNA。