[发明专利]一种Oscheius tipulae线虫冻存液及其制备方法及该冻存液的应用

说明书

技术领域

本发明涉及冻存液及其制备方法及该冻存液的应用。 

背景技术

Oscheius tipulae为小杆科线虫，与秀丽隐杆线虫C.elegans具有相近的生态位和相似的生活型。发明人在野外捕获了Oscheius tipulae并在室内培养成功。大多数线虫在以甘油为主要成分的冻存液中，于-80℃可长期保存，在室温下复苏后可正常生长繁殖。但Oscheius tipulae在甘油冻存液中无法复苏，进一步研究发现甘油对Oscheius tipulae具有致命毒性。因此常规的甘油冻存液对Oscheius tipulae的长期保存不适用。 

发明内容

本发明要解决常规线虫甘油冻存液无法冷冻保种Oscheius tipulae线虫的问题，而提供一种Oscheius tipulae线虫冻存液及其制备方法及该冻存液的应用。 

一种Oscheius tipulae线虫冻存液按体积百分含量由5%～15%的琼脂胶、10%～20%的四氢呋喃和余量为缓冲液组成； 

其中缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL； 

所述琼脂胶的制备方法如下： 

a、将KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaCl和MgSO₄加入蒸馏水中，配制成缓冲液，再放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，其中，缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL； 

b、将琼脂加入步骤a制备的缓冲液中，封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，再室温冷却凝固得琼脂胶，其中，琼脂与缓冲液的质量体积比为（0.02g～0.03g）∶10mL。 

一种Oscheius tipulae线虫冻存液的制备方法，具体按以下步骤进行： 

一、将KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaCl和MgSO₄加入蒸馏水中，配制成缓冲液，再放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，其中，缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL； 

二、将琼脂加入步骤一制备的缓冲液中，封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，再室温冷却凝固得琼脂胶； 

三、将步骤二得到的琼脂胶研碎，再加入步骤一制备的缓冲液，然后加入四氢呋喃，搅拌均匀，得到一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其中，按体积百分含量琼脂胶为5%～15%、四氢呋喃为10%～20%、余量为缓冲液。 

上述冻存液用于Oscheius tipulae线虫的冻存。 

本发明制备出一种不含甘油的适用于Oscheius tipulae长期保持的冻存液，保证了Oscheius tipulae室内研究的可持续进行。 

本发明的有益效果是：本发明解决了常规线虫甘油冻存液无法冷冻保种Oscheius tipulae线虫的问题。利用本发明的线虫冻存液可长期保种Oscheius tipulae线虫。本发明冻存的Oscheius tipulae线虫解冻复苏后正常生长繁殖，保证了对野外捕获的Oscheius tipulae线虫进行室内培养的可持续性。 

本发明用于Oscheius tipulae线虫的冻存。 

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举的具体实施方式，还包括各具体实施方式之间的任意组合。