[发明专利]一种Oscheius tipulae线虫冻存液及其制备方法及该冻存液的应用

权利要求书

1.一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其特征在于一种Oscheius tipulae线虫冻存液按体积百分含量由5%～15%的琼脂胶、10%～20%的四氢呋喃和余量为缓冲液组成；

其中缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL；

所述琼脂胶的制备方法如下：

a、将KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaCl和MgSO₄加入蒸馏水中，配制成缓冲液，再放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，其中，缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL；

b、将琼脂加入步骤a制备的缓冲液中，封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，再室温冷却凝固得琼脂胶，其中，琼脂与缓冲液的质量体积比为（0.02g～0.03g）∶10mL。

2.根据权利要求1所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其特征在于一种Oscheius tipulae线虫冻存液按体积百分含量由8%～11%的琼脂胶、12%～18%的四氢呋喃和余量为缓冲液组成。

3.根据权利要求1所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其特征在于一种Oscheius tipulae线虫冻存液按体积百分含量由6%的琼脂胶、11%的四氢呋喃和余量为缓冲液组成。

4.根据权利要求1所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其特征在于一种Oscheius tipulae线虫冻存液按体积百分含量由13%的琼脂胶、19%的四氢呋喃和余量为缓冲液组成。

5.如权利要求1所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液的制备方法，其特征在于具体按以下步骤进行：

一、将KH₂PO₄、Na₂HPO₄、NaCl和MgSO₄加入蒸馏水中，配制成缓冲液，再放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，其中，缓冲液中KH₂PO₄的浓度为0.003g/mL、Na₂HPO₄的浓度为0.006g/mL、NaCl的浓度为0.004g/mL～0.006g/mL、MgSO₄的浓度为0.001g/mL；

二、将琼脂加入步骤一制备的缓冲液中，封口膜密封后放入高压蒸汽灭菌锅中，控制温度为120℃，灭菌20min，再室温冷却凝固得琼脂胶；

三、将步骤二得到的琼脂胶研碎，再加入步骤一制备的缓冲液，然后加入四氢呋喃，搅拌均匀，得到一种Oscheius tipulae线虫冻存液，其中，按体积百分含量琼脂胶为5%～15%、四氢呋喃为10%～20%、余量为缓冲液。

6.根据权利要求5所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液的制备方法，其特征在于步骤二中琼脂与缓冲液的质量体积比为（0.02g～0.03g）∶10mL。

7.根据权利要求5所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液的制备方法，其特征在于步骤三中按体积百分含量琼脂胶为10%。

8.如权利要求1所述的一种Oscheius tipulae线虫冻存液的应用，其特征在于该冻存液用于Oscheius tipulae线虫的冻存。