[发明专利]特异性IgE抗体的检测方法、该方法所使用的试剂盒以及该试剂盒的制备和使用方法

说明书

技术领域

本技术发明涉及一种特异性IgE抗体的检测方法、该方法所使用的试剂盒以及该试剂盒的制备和使用方法，特异性IgE抗体的检测方法的显著特征是采用捕获法-酶联免疫分析模式，能够根据患者病史选择疑似过敏食物进行组合，实现“个性化组合”模式的血清特异性IgE检测，尤其适用于因食物导致过敏的患者进行确认过敏原种类。

背景技术

食物过敏已成为一类常见的食源性疾病，可引起的主要临床症状有头晕、头痛、胸闷、恶心、呕吐、皮肤瘙痒等，严重时发生休克甚至死亡，已经引起了人们的普遍关注。具有过敏体质的机体接触相应过敏原的情况下，诱导特异性免疫反应并产生特异性抗体（免疫球蛋白E，IgE），IgE能结合肥大细胞或嗜碱性粒细胞，并使机体处于致敏状态，同时此种抗体也分布在血浆中。因此，血浆（清）特异性IgE（sIgE）是过敏性疾病的重要特征，临床上常通过检测血清中存在何种sIgE抗体来推断或确认过敏原，也就是说，血清特异性IgE（sIgE）是确认过敏原的重要依据之一。众所周知，导致过敏的物质种类繁杂，特别是吸入性过敏原和食入性过敏原，而测定前并不知道患者对何种过敏原过敏。因此，临床工作需采用一系列过敏原联合测定模式，此种方法能够提高检出效率，并能节省人力和物力。

因食物所致过敏反应存在某些特殊性，患者往往是食用某种食物或含有某种食物的食品情况下才会导致某些症状，这些食物可被患者感知。因此，食物过敏的患者往往能够根据病史给临床医生提供一些有价值的信息，帮助临床医生锁定几种高度疑似的食物作为检测对象，而不需要按照常规将所有可检测的所有食物纳入检测范围，这样可以减轻患者的检测费用，节约有限的医学资源。

不同受检患者病史不同，疑似需检测过敏食物的组合不同。在此种情况下，临床需要一种能够实现“个性化组合”过敏原检测试剂，满足食物过敏性疾病患者确认过敏原的特殊要求。

现有技术中确认过敏原的血清sIgE检测法采用免疫化学原理，即用已知抗原检测未知抗体。

其中，放射性过敏原吸附试验是血清sIgE检测最经典的方法。该方法是将已知过敏原包被在固相材料（硝酸纤维膜，NC膜）表面，与待检血清（含sIgE）温育后，再加上放射性核素标记抗人IgE（标记二抗）温育。如血清中含有与过敏原对应的特异性抗体，固相材料表面即形成已知抗原-待检抗体-放射性核素标记抗人IgE复合物（如牛奶-牛奶特异性IgE-抗人IgE）；用磷酸盐缓冲盐水洗涤NC膜，去除未结合标记抗体。再用放射性检测仪检测NC膜表面是否具有放射活性即可判断血清中是否存在特异性IgE抗体。该方法的缺陷是：放射性过敏原吸附试验时，每次试验只能检测一种过敏原，不能同时检测多种过敏原，并且此种方法存在放射性核素污染等问题，临床已不再使用。

“膜斑点印记”是目前被临床广泛使用的方法之一，可同时检测多种过敏原。此方法以“条状”NC膜作为固相载体，以线性方式于NC膜不同物理位置包被一系列食物蛋白提取液作为已知抗原。包被有抗原的NC膜于反应池内与稀释待检血清温育，血清中待检sIgE分别与相应抗原结合；再加入酶标抗体（抗人IgE），与结合在膜表面的sIgE结合；洗涤去除游离的标记抗体，加入显色底物即可根据NC膜的显色条带，结合参照标尺（过敏原包被信息）确定待检样本含有何种sIgE。膜斑点印记法可同时检测10-12种食物过敏原，但组合方式固定，不能根据患者情况进行“随机”组合，不能满足食物过敏原“个性化组合”的要求。同时，此方法操作复杂、耗时，且不能准确测定sIgE的含量。

酶联免疫吸附试验因具有操作简单、适合基层实验室等优点，深受临床实验室欢迎。酶联免疫方法也用于食物过敏原sIgE检测，杭州浙大基因工程有限公司申请一项技术发明专利（申请号200710157167.9）公开一种酶联免疫法：过敏原特异性IgE ELISA检测试剂盒及其制备方法。此项发明是用一组过敏原分别包被96孔酶标反应板特定位置（孔），但过敏原的组合方式固定。待检稀释血清分别加入各个反应孔内，温育后洗板；再加入酶标抗体（抗人IgE），与结合在微孔表面的sIgE结合；洗涤去除游离的标记抗体，加入显色底物，通过酶标仪读取吸光度值，根据吸光度值参照标准曲线可以对待检sIgE水平进行定量。与膜斑点印记法相比，酶联免疫法操作简单，结果容易判读，但同样采用固定组合方式，不能根据患者情况进行“随机”组合，不能满足食物过敏原“个性化组合”的要求。

发明内容