[发明专利]特异性IgE抗体的检测方法、该方法所使用的试剂盒以及该试剂盒的制备和使用方法

权利要求书

1.特异性IgE抗体的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）用抗人-IgE抗体包被酶标反应板；（2）将已知抗原标记生物素分子，形成生物素标记的抗原；（3）在检测sIgE时，根据患者病史确定疑似食物过敏原种类和需要检测孔的数量；根据选定的过敏原选择对应的生物素化抗原，每种生物素化抗原分别加入酶标反应板上的不同检测孔中，检测孔再中分别加入待检血清样本；如样本中存在与生物素标记的抗原对应的sIgE，此待检sIgE将同时与该对应的生物素化抗原和酶标反应板表面包被的抗人IgE抗体结合；（4）洗涤去除检测孔中未结合的生物素标记抗原，再加入酶标记的链霉亲和素溶液，使之与生物素结合，如果待检样本中存在与生物素标记的抗原对应的sIgE，检测板表面将形成抗人IgE-待检sIgE-已知生物素标记抗原-链霉亲和素-酶复合物；（5）最后加入显色底物，终止催化反应后用酶标仪读取吸光度值，即可确定过敏原种类。

2.应用权利要求1所述的特异性IgE抗体的检测方法所使用的试剂盒，其特征在于：至少包括如下试剂：（1）包被有抗人IgE抗体的酶标反应板；（2）多种生物素化抗原。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述生物素化抗原包括生物素化的牛奶、禽蛋、蟹、虾、花生、豆类、坚果抗原。

4.根据权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于：还包括酶标记链霉亲和素；血清标本稀释液；阳性对照血清；阴性对照血清；酶显色底物；终止液；浓缩洗液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：链霉亲和素为辣根过氧化物标记的链霉亲和素；酶显色底物包含显色底物A和显色底物B，其中显色底物A含双氧水，显色底物B含四甲基联苯胺。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述酶标反应板为96孔聚苯乙烯酶标反应板。

7.权利要求2至6中任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）将抗人IgE抗体以常规手段包被至酶标反应板上，真空包装；（2）配制酶标记链霉亲和素；（3）常规方法制备各组生物素化抗原；（4）配制血清标本稀释液；（5）制备阳性对照血清：筛选过敏患者血清，稀释并加防腐剂；（6）制备阴性对照血清：筛选无过敏史，且血清总IgE低于30IU/毫升的血清，稀释并加防腐剂；（7）将（1）至（6）中制备的试剂和常规酶联免疫试剂盒中常用酶显色底物、终止液和浓缩洗液装入试剂盒内。

8.根据权利要求2至6中任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）准备过程：①将盒中试剂和待测血清样本平衡至室温；②将待测血清样本用血清样本稀释液稀释；③浓缩洗液用蒸馏水稀释备用；④根据待测血清样本检测要求，选择几种生物素化抗原，在酶标反应板上做好标记；（2）检测过程：①将选中的生物素化抗原分别加入酶标反应板所对应的标记位置，同时加入稀释后的待检血清；②阳性对照孔内加入任意一种生物素化抗原和阳性对照血清稀释液；③阴性对照孔内加入任意一种生物素化抗原和阴性对照血清稀释液；④将酶标反应板于37℃温育，60min，取出反应板，用稀释后浓缩洗液对其进行反复洗涤；⑤各反应孔分别加入酶标记链霉亲和素溶液；37℃温育，30min，取出反应板，用稀释后浓缩洗液对其进行反复洗涤；⑥加入酶显色底物，避光室温反应15min；再加入终止液终止显色反应，15min内检测450nm吸光度值。

9.根据权利要求8所述的试剂盒使用方法，其特征在于：阳性对照孔中加入的生物素化抗原与阳性对照血清稀释液的加入量相等。

10.根据权利要求8所述的试剂盒使用方法，其特征在于：阴性对照孔中加入的生物素化抗原与阳性对照孔中加入的生物素化抗原的种类相同，阴性对照孔中加入的生物素化抗原与阴性对照血清稀释液的加入量相等。