[发明专利]一种弓形虫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检疫技术领域，具体地说，涉及一种弓形虫检测试剂盒。

背景技术

弓形虫是一种专性细胞内寄生原虫，并能感染几乎所有温血动物的有核细胞。引起世界范围广泛流行的人兽共患寄生虫病。据估计世界上大约三分之一的人感染了该寄生虫。弓形虫是一种机会性致病寄生虫，主要危害孕妇及免疫系统低下的人群，免疫功能正常的人感染并不引起明显的临床症状。

弓形虫感染动物后能够诱导机体产生强烈的Th1型细胞免疫反应，导致特异性CD4+T、CD8+T细胞分泌大量IFN-γ以抵抗弓形虫感染。

目前，临床最常采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对弓形虫特异性抗体、循环抗原进行检测以确定弓形虫感染。弓形感染动物体后会产生多种同型抗体，现在临床上多检测IgG及IgM。弓形虫感染1-2周后才能在血液中检测到该抗体，1-2月后达到高峰，随之有不同程度的下降。IgM的出现与消失都较IgG快，并且由于风湿等疾病因子的干扰，现在商品化的IgM检测试剂盒存在低特异性的缺点。感染弓形虫后，抗体的产生因个体差异而明显不同，甚至出现很大比例的假阴性，因而抗体的检测效率不高，所以迫切需要开发一种敏感性高、特异性强的弓形虫检测的新方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种检测弓形虫的试剂盒。

技术方案如下：

一种弓形虫检测试剂盒，所述试剂盒包括：弓形虫抗原、IFN-γ捕获抗体、IFN-γ标准品、生物素标记的IFN-γ检测抗体。

进一步地，所述试剂盒还包括：细胞培养基、阳性对照物、阴性对照物、包被液、封闭液、HRP标记的链霉亲和素、显色液和终止液。

其中，所述阳性对照物为刀豆蛋白A。

其中，所述细胞培养基含有10%胎牛血清，100单位/ml的青链霉素，0.0002%的β-巯基乙醇。

进一步地，所述弓形虫抗原包括弓形虫表面糖蛋白SAG1（GenBank:S76248.1）、SAG2（GenBank:JX045478.1）；缓殖子期特异性蛋白BAG1（ToxoDB:TGME49_259020）；致密颗粒蛋白GRA1（GenBank:M26007.1）、GRA3（GenBank:U13771.1）、GRA4（GenBank:M76432.1）、GRA5（GenBank:EU918733.1）、GRA6（GenBank:HM776942.1）、GRA7（GenBank:DQ459443.2）、GRA10（GenBank:AY769952.1）、GRA15（ToxoDB:TGME49_275470）；棒状体蛋白ROP1（GenBank:M71274.1）、ROP2（GenBank:Z36906.1）、ROP7（GenBank:AM056071.1）、ROP16（GenBank:GQ249080.1）、ROP18（GenBank:AM075204.1）；微线蛋白MIC1（GenBank:Z71786.1）、MIC2（ToxoDB:TGME49_201780）、MIC3（GenBank:JF330835.1）、MIC4（GenBank:FJ785459.1）、MIC6（GenBank:AF110270.1）、MIC8（GenBank:GQ260152.1）；棒状体颈部蛋白RON4（GenBank:DQ096566.1）；顶端膜抗原AMA1（GenBank:FJ593880.1）和热应激蛋白HSP70（GenBank:AB019539.1）。

更进一步地，所述弓形虫抗原是通过超声裂解弓形虫速殖子或缓殖子虫体、或者利用大肠杆菌原核表达并纯化后制备得到的。

前述试剂盒的使用方法为：

（1）无菌采集动物或人的抗凝血；

（2）全血稀释后铺细胞培养板；

（3）用弓形虫抗原对动物或人外周血或外周血中分离的细胞进行刺激，使其中的弓形虫特异性T细胞释放出IFN-γ；

（4）收集培养细胞的上清；

（5）ELISA定量检测样品中IFN-γ的含量；

（6）根据试剂盒设置的阴阳性对照品刺激IFN-γ的水平，比较IFN-γ比值差异，判断动物或人是否感染过弓形虫。

本发明的有益效果在于：