[发明专利]一种基于抗EGFR单链抗体及精氨酸九聚体的融合蛋白与应用

权利要求书

1.一种基于抗EGFR单链抗体及精氨酸九聚体的融合蛋白，其特征在于，包括通过连接肽相连接的重链可变区和轻链可变区，轻链可变区的末端连接有精氨酸九聚体；其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.3所示。

2.一种编码基于抗EGFR单链抗体及精氨酸九聚体的融合蛋白的核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.4所示。

3.一种基于抗EGFR单链抗体及精氨酸九聚体的融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下操作：

1）将如SEQ.ID.NO.4所示的核苷酸克隆入pGEX4T-1表达载体，构建重组质粒；

2）将所构建的重组质粒转染大肠杆菌，并在含氨苄青霉素的YTA培养基中培养，培养至OD600为0.4～0.6时，添加IPTG诱导表达，收集诱导后的菌液离心，收集细菌后破菌、离心，收集上清；

3）使用GST亲和层析柱纯化分离上清中的融合蛋白，超滤浓缩后经凝血酶酶切，得到基于抗EGFR单链抗体及精氨酸九聚体的融合蛋白。

4.一种抗EGFR单链抗体，其特征在于，包括通过连接肽相连接的重链可变区和轻链可变区，其氨基酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。

5.一种编码抗EGFR单链抗体的核苷酸，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ.ID.NO.2所示。

6.权利要求1或4所述的融合蛋白在制备抗肿瘤药物、抗肿瘤辅助药物或肿瘤诊断试剂中的应用。

7.权利要求1或4所述的融合蛋白在制备靶向EGFR的药用载体、携带载体中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，包括所述的融合蛋白在携带siRNA、microRNA、脂质体中的一种或几种进入肿瘤细胞内部并释放的应用。

9.权利要求2所述的核苷酸在构建表达载体，以及制备抗肿瘤药物、抗肿瘤辅助药物或肿瘤诊断试剂中的应用。

10.权利要求5所述的核苷酸在构建表达载体，以及制备抗肿瘤药物、抗肿瘤辅助药物或肿瘤诊断试剂中的应用。