[发明专利]羊驼TGF-β1-3′UTR双荧光素酶报告基因载体及其构建和应用

权利要求书

1.羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体，所述羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体含有双荧光素酶报告基因载体和SEQ ID No.3所示核苷酸序列的基因片段，所述核苷酸序列位于羊驼TGF-β1基因的3'UTR区。

2.根据权利要求1所述的羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体，其特征是所述的双荧光素酶报告基因载体为pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression。

3.一种羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体的构建方法，包括以下步骤：

1) 设计如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的特异的TGF-β1-3'UTR引物：

TGF-β1-3'UTR-Sac I-PF：5'CGAGCTCCCCAAGGTGGAGCAG3'；

TGF-β1-3'UTR-Xba I-PR：5'GCTCTAGATGTCCTTAAATACAG3'；

2) TRizol法提取羊驼黑色素细胞总RNA，以上述特异TGF-β1-3'UTR引物扩增，得到SEQ ID No.3所示核苷酸序列的TGF-β1-3'UTR片段；

3) 以Sac I和XbaI限制性内切酶分别酶切回收的TGF-β1-3'UTR片段和pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression双荧光素酶报告基因载体，将TGF-β1-3'UTR片段插入pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression的Sac I和XbaI酶切位点，构建羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体pmirGLO-TGF-β1-3'UTR。

4.权利要求1羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体在检测miR663对TGF-β1基因调控作用上的应用。

5.权利要求1羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体在研究miR-663对候选靶基因TGF-β1生物学功能和调控机制上的应用。

6.权利要求1羊驼TGF-β1-3'UTR双荧光素酶报告基因载体在靶基因为TGF-β1的microRNA功能研究上的应用。