[发明专利]促进黑色素细胞色素产生的皮肤制剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种皮肤制剂，其包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物，所述共培养组合物中黑色素细胞具有增强的色素产生能力并且所述共培养组合物通过培养形成有1～5层细胞层的以二维方式连接的展开培养物。本发明还涉及包含该皮肤制剂或皮肤制剂的提取物的培养液以及该皮肤制剂的制备方法及其应用。

技术领域

本发明属于细胞培养领域，具体涉及一种色素生产能力已经得到增强的含有黑色素细胞的皮肤制剂。

背景技术

决定皮肤颜色最重要的因子是一种被称为黑色素的色素性物质。黑色素的形成是由存在于表皮基底层的黑色素细胞产生的。如果这个黑色素的产生出现异常被抑制，或者黑色素细胞消失，就会形成一种后天性色素脱失症，俗称为白癜风。现阶段，针对白癜风的治疗方法包括甾族化合物治疗法以及光化学疗法。但是，这些治疗方法的预后不是很理想，都需要接受持续性的治疗。

除上述治疗方法外，也有从其他部位取皮或毛囊进行移植的治疗方法。但是，这种疗法会造成与治疗部位同等面积的皮肤缺损，因此当治疗部位面积相对大时就不能进行此类治疗了。另外，也有从自体采取黑色素细胞，经过体外培养后再注射移植的治疗方法。此疗法与自体取皮相比，可以进行相对大面积的治疗，但是在注射部位造成色素分布不均，大面积治疗时要达到色素的均匀分布是非常困难的。

另一方面，以创伤治愈以及烧伤治愈为目的的表皮培养方案也被提出。皮肤培养不仅可以实现大范围的治疗而且非常有效果。但是，目前的表皮培养都不含有黑色素细胞，就算有黑色素细胞也无法有效地使黑色素形态正常形成。虽然在细胞培养时，促进黑色素产生的方法有很多种，例如：用紫外线照射进行物理刺激，添加黑色素细胞活性因子等。但是，即使使用了这类的处理方法也无法有效且稳定地形成正常的色素形态。另外，当黑色素细胞和其他皮肤细胞共同培养的时候，如果进行这些处理，会影响到黑色素细胞以外细胞的成长，所以在运用上还是相当困难的。

针对上述问题，本发明提供了一种新的使培养物接近人体肤色，使色素形态正常形成，促进黑色素细胞能够很好地产生的方法以及由此方法得到的皮肤制剂。

发明内容

本发明的本发明者经过研究发现，通过对提取的黑色素细胞和表皮细胞进行共培养，发现了如何能够很好的促进黑色素细胞色素的产生的新方法。本发明方法制备的皮肤制剂具有促进黑色素细胞的色素产生的作用，因此能够很好的还原皮肤色素，因而适用于治疗白癜风以及进行美白药物的筛选等领域的研究。

在本发明的一方面，提供了一种皮肤制剂，其包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物，所述共培养组合物中黑色素细胞具有增强的色素产生能力并且所述共培养组合物通过培养形成有1～5层细胞层的以二维方式连接的展开培养物。

在本发明的一个实施方式中，所述皮肤制剂中表皮细胞的数量与黑色素细胞的数量之比为100:1-50。在一个优选的实施方式中，所述皮肤制剂中表皮细胞的数量与黑色素细胞的数量之比为100:3-10。

在本发明的另一方面，提供了一种促进黑色素细胞色素产生的培养液，所述培养液包含本发明的皮肤制剂，即包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物，所述共培养组合物中黑色素细胞具有增强的色素产生能力并且所述共培养组合物通过培养形成有1～5层细胞层的以二维方式连接的展开培养物。

在本发明的另一方面，提供了一种促进黑色素细胞色素产生的培养液，所述培养液包含本发明的皮肤制剂，即包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物，所述共培养组合物中黑色素细胞具有增强的色素产生能力并且所述共培养组合物通过培养形成有1～5层细胞层的以二维方式连接的展开培养物。

在本发明的另一方面，提供了一种皮肤制剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a.从皮肤组织中提取黑色素细胞和表皮细胞；

b.将步骤a)获得的黑色素细胞和表皮细胞共培养；

c.任选地去除成纤维细胞；