[发明专利]促进黑色素细胞色素产生的皮肤制剂的制备方法

权利要求书

1.一种制备包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物的皮肤制剂的方法，所述共培养组合物中黑色素细胞具有增强的色素产生能力并且所述共培养组合物通过培养形成有1～5层细胞层的以二维方式连接的展开培养物，所述方法包括：

a.从皮肤组织中提取黑色素细胞和表皮细胞；

b.将步骤a)获得的黑色素细胞和表皮细胞在无血清培养液中共培养；

c.任选地去除成纤维细胞；

d.通过传代培养，使黑色素细胞均匀分布；

e.评价黑色素细胞的色素生产能力，选定接近皮肤颜色的皮肤制剂；

其中所述步骤b)中所述包含黑色素细胞和表皮细胞的共培养组合物先在Ca2+浓度控制在0.1mM内、葡萄糖浓度为1000mg/L的无血清培养液中培养，然后，使用Ca2+浓度控制在0.5-1.9mM之间、葡萄糖浓度为3000-5000mg/L的无血清培养基作为分化培养液进行培养，培养为3-14后，形成多层的皮状展开培养物。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述皮肤制剂中表皮细胞的数量与黑色素细胞的数量之比为100:1-50。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述皮肤制剂中表皮细胞的数量与黑色素细胞的数量之比为100:3-10。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d)的传代控制在3代以内。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c)去除成纤维细胞的过程包括加入抑制成纤维细胞增殖的试剂，选自EDTA、霍乱毒素、异丙肾上腺素、IBMX。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抑制成纤维细胞增殖的试剂是0.01-0.02％EDTA的PBS。