[发明专利]一种聚乙二醇修饰及蛋白质融合表达的整合素阻断剂AP-25及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物领域，具体涉及具有抑制肿瘤血管生成、具有整合素亲和性和结合能力的一类整合素阻断剂，此阻断剂是一种聚乙二醇修饰或融合多肽，该整合素阻断剂聚乙二醇修饰或融合多肽可用于制备治疗血管性疾病，包括类风湿、眼病及肿瘤药物中的应用。

背景技术

新生血管生成，在正常生理条件下，受到高度调节，在生殖、胚胎发育、组织修复和创伤愈合中是必不可少的过程，同时新生血管的生成也与很多疾病有着密切联系，如类风湿关节炎、眼科疾病如年龄相关性黄斑变性(AMD)、肿瘤等。

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是临床最常见的炎性关节病和主要致残因素之一。类风湿关节炎的病因和发病机制尚未完全明了，其基本病理特点是血管炎和滑膜炎。关节内滑膜血管增生，形成血管翳，导致滑膜增厚，渗出增多，分泌多种细胞因子，侵犯软骨并引起骨质损害。对其周围的肌腔、韧带、腱鞘以及肌肉等组织也均可侵蚀，从而影响关节的稳定，容易发生关节畸形而出现功能障碍。血管炎亦可侵犯周身各脏器组织，形成系统性疾病。

年龄相关性黄斑变性(AMD)主要表现国视网膜色素上皮细胞对视细胞外节盘膜吞噬消化能力下降，结果使未被完全消化的盘膜残余小体潴留于基底部细胞原浆中，并向细外排出形成玻璃膜疣，进而引起玻璃膜本断裂，脉络膜毛细血管通过破裂的玻璃膜时进入视网膜神经上皮下，形成脉络膜新生血管，由于新生血管壁的结构异常，导致血管的渗漏和出血，从而引发一系列的继发性病变。

研究表明，实体瘤的生长依赖于新生血管生成，新生血管不仅可以提供肿瘤所需要的营养和氧气，排泄代谢产物，而且是远处转移的途径。因此，阻断新生血管形成可能成为阻止肿瘤生长和转移的手段，从而激发了对促血管生成分子和抗血管生成分子的广泛研究。

相比传统肿瘤治药物疗，肿瘤血管生成抑制剂最大优点在于：①选择性作用于血管内皮细胞，全身毒副作用小；②靶细胞为血管内皮细胞，药物易从血液中到达与之接触发生作用；③血管内皮细胞无或少突变，不易产生耐药性，可长期用药；④可与放化疗方法联合应用并减轻后者的毒副反应。

目前，国际上开发出的整合素阻断剂已进入II期临床。而我国尚未有相似或同类产品进入市场，非常有必要开发我国自主知识产权的此类药物。ZL2005100403785高效抑制血管生成多肽及其制备方法和应用，介绍几种整合素抑制剂，其一为整合素阻断剂多肽序列为：Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly-Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro(序列中含有两对二硫键，配对方式为1-4、2-3)(命名为AP-25)，该序列包含了整合素配体序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly-Gly-Gly-Gly)和新生血管抑制序列(Ile-Val-Arg-Arg-Ala-Asp-Arg-Ala-Ala-Val-Pro)，其中整合素配体序列中含有RGD-4C序列(Ala-Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys-Gly)，整合素阻断剂多肽序列可以有效地结合于肿瘤特异性表达的整合素亚型，并且该序列中含有新生血管抑制序列，能够抑制肿瘤新生血管形成，进而达到抑制肿瘤生长和转移的效果。该多肽经反复体内外活性评价证实具有较好的抑瘤效果，能够显著抑制内皮细胞迁移、抑制肿瘤新生血管生成，从而抑制肿瘤的生长。然而上述多肽的半衰期短，拟用临床人的给药是每天静脉滴注，这给患者带来了一定的痛苦。

但是AP-25有两对二硫键，二硫键在合成过程中容易错配，形成沉淀，产率低，不容易产业化；另外AP25的体内半衰期短，临床上使用需要静脉滴注，来保证长时间内体内血药浓度。对于AP25的上述不足，需要通过修饰或融合蛋白来改进，以便将其开发成创新药物。