[发明专利]冻干的重组VWF配方

说明书

本申请是申请日为2009年10月21日、中国国家申请号为200980142453.5、发明名称为“冻干的重组VWF配方”申请的分案申请。

技术领域

一般来说，本发明涉及冻干的重组VWF的配方和生产包含重组VWF的冻干组合物的方法。

背景技术

冯维勒布兰特因子（VWF）是一种糖蛋白，它以一系列大小从约500至20,000kD的多聚体形式在血浆中循环。多聚体形式的VWF是由250kD的多肽亚单位通过二硫键相连而组成。VWF介导最初的血小板粘附于受损血管壁的内皮下膜。只有较大的多聚体表现出止血活性。据推测，内皮细胞分泌较大的聚合形式的VWF，并且那些具有低分子量的形式的VWF（低分子量VWF）由蛋白质裂解产生。大分子质量的多聚体存储在内皮细胞的怀布尔-帕拉德体（Weibel-Pallade bodies）内，并一旦受刺激就释放。

VWF由内皮细胞和巨核细胞作为预前体VWF（prepro-VWF）合成，该前原肽在很大程度上由重复的结构域组成。一旦信号肽裂解，原VWF通过在其C-末端结构域的二硫键连接而二聚化。二聚体充当多聚体化的原体，多聚体化受自由末端之间的二硫键连接的控制。在装配成多聚体后，蛋白水解除去原肽序列（Leyte et al.,Biochem.J.274(1991),257-261）。

从克隆的VWF的cDNA预测的初级翻译产物是有2813个残基的前体多肽（预前体VWF）。预前体VWF由一段22个氨基酸的信号肽和一段741个氨基酸的原肽组成，成熟的VWF包含2050个氨基酸（Ruggeri ZA,and Ware,J.,FASEB J.,308-316(1993))。

VWF的缺陷是冯维勒布兰特疾病（VWD）的病因，该病的特征为或多或少地表现有出血表型。3型VWD是最严重的形式，其VWF完全缺失，而1型VWD涉及VWF在数量上的损失，其表型可以是非常温和的。2型VWD涉及到VWF性质上的缺陷，可以如3型VWD那样严重。2型VWD有很多亚型，有的与高分子量多聚体的丧失或减少有关。冯维勒布兰特疾病2A型（VWS-2A）的特征是中等的和大的多聚体同时丢失。VWS-2B的特征是最高分子量多聚体的丧失。其他与VWF有关的疾病和紊乱是本领域已知的。

美国专利No.6,531,577、7,166,709和欧洲专利申请No.04380188.5描述了血浆来源的VWF的配方。然而，除了与血浆来源的VWF的数量和纯度问题以外，还有血源性病原体（如病毒和变异克雅氏病（vCJD））的风险。此外，已知VWF在应激条件下形成聚集。

因此，本领域存在对开发一种稳定的含有重组VWF的药品配方的需求。

发明内容

本发明提供了对冻干的重组VWF有用的配方，产生一种高度稳定的药物组合物。对于那些能受益于给药重组VWF的紊乱或症状，该稳定的药物组合物可用作一种治疗剂来治疗受此类紊乱或症状折磨的个体。

在一个实施方式中，所提供的一种稳定的冻干重组冯维勒布兰特因子（rVWF）的药品配方包含：（a）rVWF；（b）一种以上缓冲剂；（c）一种以上氨基酸；（d）一种以上稳定剂；和（e）一种以上表面活性剂；所述rVWF包含一种选自下组的多肽：a）SEQ ID No.:3所示的氨基酸序列；b）所述a）的生物活性类似物、片段或变体；c）由SEQ ID No.:1所示多核苷酸编码的多肽；d）所述c）的生物活性类似物、片段或变体；和e）由可在适度严格的杂交条件下与SEQ ID No.:1所示多核苷酸杂交的多核苷酸所编码的多肽；所述缓冲液包含pH缓冲剂，其浓度在约0.1mM到约500mM范围内，且pH在约2.0至约12.0范围内；所述氨基酸的浓度在约1到约500mM；所述稳定剂的浓度在约0.1至约1000mM；并且所述表面活性剂的浓度在约0.01g/L到约0.5克/L。

在另一实施方式中，所述rVWF包含SEQ ID No.:3所示的氨基酸序列。在又一个实施方式中，所述缓冲剂选自由柠檬酸盐、甘氨酸、组氨酸、HEPES、Tris及它们的组合物所组成的组。在另一个实施方式中，所述缓冲剂为柠檬酸盐。在各种实施方式中，pH在约6.0到约8.0、约6.5到约7.5的范围内、或约7.3。在另一个实施方式中，pH值约为7.3。