[发明专利]双核酸标记的比率电化学免疫传感器

权利要求书

1.本发明涉及一种双核酸标记的比率电化学免疫传感器。其特征在于该传感器由二茂铁(Fc)标记DNA3捕获探针、亚甲基蓝(MB)标记DNA1-抗体1和DNA2-抗体2组成：DNA3另一端用巯基(SH)修饰，在金电极(Au)上通过Au-S键组装；DNA1与DNA3可以杂交，将MB引到电极表面，形成比率电化学免疫传感界面；在目标蛋白质存在时，DNA2-抗体2与目标物和DNA1-抗体1通过夹心免疫反应形成免疫复合物，并产生邻位效应，该效应促使DNA2与DNA1杂交，导致MB-DNA1-抗体1脱离免疫传感界面，自由的DNA3在金电极表面形成发夹结构，而使Fc向电极表面靠近；通过检测免疫反应后减少的MB的氧化电流和增加的Fc的氧化电流，用Fc和MB的氧化电流之比进行溶液中目标蛋白质的浓度测定。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于所述的捕获探针DNA3的3’端修饰SH，5’端修饰Fc，从3’端开始的1-4碱基与从5’端开始的1-4碱基完全互补，可形成发卡结构。

3.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于所述的DNA1的5’端修饰MB，从5’端开始的4-15碱基与捕获探针DNA3的3’端开始的1-12碱基完全互补。

4.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于所述的DNA2从3’端开始的1-11碱基与DNA1的5’端开始的4-14碱基完全互补。

5.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于如下检测步骤：

(1)将样品溶液和DNA2-抗体2混合，并把混合液滴在比率电化学免疫传感界面进行温育；

(2)传感器用冲洗液冲洗后，插入检测溶液，用交流伏安法进行电化学检测，获得Fc和MB的氧化电流；

(3)求得Fc氧化电流对MB氧化电流的比值，将该比值与目标蛋白质的浓度进行对数作图，获得标准曲线，通过标准曲线测得待测溶液中目标蛋白质的浓度。