[发明专利]尿液中35种毒药物的串联四级杆气相色谱质谱检测法

权利要求书

1.一种尿液中35种毒（药）物的串联四级杆气相色谱质谱联用检测法，其特征在于：首先用35种毒（药）的标准品在串联四级杆气相色谱质谱联用仪上建立多重反应检测方法，确定2～3对特征母离子和子离子对及每种毒（药）物的保留时间；待测尿样用乙醚萃取，经超声、离心、吹干和溶解后，用串联质谱MRM定性、定量分析毒（药）物；

色谱条件是：仪器，Agilent7890GC/7000QQB；GC条件：DB-1MS（30m×0.25mm×0.25μm）石英毛细管柱，进样口温度：250℃，不分流；程序升温：起始温度50℃，以12℃/min升温到290℃保持10min，流速：1ml/min，进样量：0.5μL；MS条件：EI离子源，电子能源70eV，离子源温度230℃，接口温度：280℃，四级杆温度：150℃，电子倍增器电压：1381eV。

2.根据权利要求1所述的串联四级杆气相色谱质谱联用检测法，其特征在于：

1）标准溶液配制：所加入35种毒（药）物混合标准品的甲醇溶液中敌敌畏，乐果，甲基对硫磷，马拉硫磷，对硫磷、毒鼠强浓度均为22.73μg/ml；巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥、利多卡因、苯巴比妥、阿托品、阿米替林、氯丙嗪、咪达唑仑、硝西泮、氯硝西泮、氯氮平、艾司唑仑、阿普唑仑、三唑仑浓度均为16.67μg/ml；MDMA、扑热息痛、哌替啶、氨基比林、曲马多、扑尔敏、美沙酮、多虑平、卡马西平、地西泮浓度均为20.83μg/ml；甲基苯丙胺、麻黄碱、氯胺酮、可待因浓度均为25μg/ml；

2）检测方法

2.1）样品处理

取待检尿液1ml，加入乙醚6ml分三次萃取，每次2ml；在40℃超声萃取10min，然后以10000r/min离心3min，三次萃取有机层合并转移至另一试管中，于40℃下氮气吹干，残留物用100μL甲醇溶解，取1μL进GC/MS/MS分析；

2.2）GC条件

GC条件：DB-1(30m×0.25mm×0.25m)石英毛细管柱，进样口温度：250℃，不分流；程序升温：起始温度50℃，以12℃/min升温到290℃保持10min，流速：1ml/min，进样量：0.5μL；

2.3）MS条件

MS条件：EI离子源，电子能源70eV，离子源温度230℃，接口温度：280℃，四级杆温度：150℃，电子倍增器电压：1381eV；

35种毒药物的最优母离子子离子对见下表1：

表135种毒（药）物色谱保留时间及质谱特征离子对

表中的*为定量离子对；

3）定性定量方法：以各毒品的相对保留时间和各毒品的监测母离子/子离子对的丰度比为定性依据，各毒品的保留时间见上表1；用外标法定量，以各毒品的峰面积计算其在样品中的残留量；

4）基质效应

在空白尿样按上述的“2.1”步骤处理后，加入35种毒（药）物的标准溶液，进行GC-MS/MS分析，得标准品峰面积A；同样对35种毒（药）物的标准溶液进行分析，得到相应的峰面积B；基质效应=A/B×100%，结果表明除了硝西泮和氯硝西泮是基质抑制其它33种毒药物都是基质增强，其中阿托品的基质增强效应最明显，具体见下表2；

表235种毒药物基质效应列表

5）标准曲线及检测限

取空白尿样，加入35种毒（药）物标准溶液混合，配成尿液中扑热息痛质量浓度分别为3.0、4.0、5.0、7.5、10.0、15.0μg/mL；尿液中敌敌畏质量浓度分别为2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、10.0μg/mL；尿液中毒鼠强、乐果、甲基对硫磷、马拉硫磷和对硫磷质量浓度分别为2.0、3.0、4.0、5.0、7.5、9.1μg/mL；尿液中甲基苯丙胺、麻黄碱、氯胺酮和可待因质量浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.5、5.0、7.5μg/mL；尿液中其余24种毒药物质量浓度分别为2.0、3.0、4.0、4.5、5.0、6.5μg/mL的标准溶液；按2.1步骤方法前处理后进行GC-MS/MS分析；以毒药物峰面积（A）对毒药物质量浓度（C，μg/mL）绘制标准曲线，并求得直线回归方程和相关系数；最低检出限为按2.1步骤方法处理样品所能检测到的尿液中毒药物浓度（以3倍信噪比计算），结果可见该方法中35种毒药物的线性方程相关系数r均为0.98以上，具体见表3；

表335种毒（药）物的标准曲线方程、相关系数和检出限