[发明专利]中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法

权利要求书

1.一种中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于包含以下步骤：

1）提取待鉴定叶螨总DNA；

2）使用叶螨中扩增ITS的通用引物PCR扩增ITS序列；

3）将上述PCR产物作为酶切模板,分别使用Rsa I、Mbo II、HpyF3I、Hinf I4种酶进行酶切反应，取酶切产物，进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统下观察并拍照记录结果；

4）将待鉴定图谱与标准酶切图谱比对，通过比较酶切条带的数量与位置从而确定待鉴定叶螨的物种。

2.根据权利要求1所述的中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于所述的叶螨中扩增ITS的通用引物选自SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2或者SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

3.根据权利要求1所述的中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于所述PCR的反应体系如下：

所述PCR的扩增条件：预变性：95℃，4min；35个循环：变性95℃，30s，退火49℃，30s，延伸72℃，90s；最后再以72℃延伸10min。

4.根据权利要求1所述的中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于所述的PCR扩增后，取PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳后在凝胶成像系统下观察并确认是否成功扩增出目的片段，目的片段作为下一步酶切反应的酶切模版。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于所述的标准酶切图谱是使用通过形态学进行分类鉴定或经测序分类鉴定的常见种叶螨分别按照步骤1）～3）建立的电泳图谱。

6.根据权利要求5所述的中国叶螨属常见种的PCR-RFLP鉴定方法，其特征在于所述的常见种叶螨包括二斑叶螨绿色型、二斑叶螨红色型、截形叶螨、神泽叶螨、卢氏叶螨、豆叶螨、马来叶螨和皮氏叶螨。