[发明专利]一种热稳定的淀粉酶突变体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种热稳定的淀粉酶突变体，其特征在于，是淀粉酶的N端区域与短肽通过PT-linker连接得到的突变体；短肽氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

2.权利要求1所述突变体，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

3.一种热稳定的淀粉酶突变体，其特征在于，氨基酸序列如SEQIDNO.2所示的淀粉酶N端区域与氨基酸序列如SEQIDNO.1所示的短肽通过PT-linker连接得到的突变体。

4.权利要求1-3任一所述突变体，其特征在于，所述PT-linker序列如SEQIDNO.3所示。

5.一种制备权利要求4所述淀粉酶突变的方法，其特征在于，步骤如下：

1)根据短肽和PT-linker序列，采用化学全合成的方法全合成后克隆到质粒pUC57中，构建重组质粒pUC57-P；

2)根据淀粉酶基因序列，采用化学全合成的方法全合成后克隆到质粒pET-20b(+)中，构建重组质粒pET-20b(+)-Amy；

3)将重组质粒pUC57-P中的短肽和PT-linker序列克隆到重组质粒pET-20b(+)-Amy中，构建含有短肽、PT-linker和淀粉酶片段的重组质粒pET-20b(+)-AmyP，将短肽融合到淀粉酶的N端，获得含有突变淀粉酶序列与短肽序列融合状态的重组载体；

4)将突变后重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，诱导表达，获得突变体。

6.权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述短肽氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。

7.权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述淀粉酶氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。

8.权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述PT-linker氨基酸序列如SEQIDNO.3所示。

9.权利要求1-3任一所述淀粉酶突变体在降解、催化淀粉性基质中的应用。