[发明专利]检测H7亚型禽流感病毒的胶体金试纸条有效
| 申请号: | 201410052927.X | 申请日: | 2014-02-17 |
| 公开(公告)号: | CN103941005A | 公开(公告)日: | 2014-07-23 |
| 发明(设计)人: | 谢芝勋;黄娇玲;罗思思;谢志勤;谢丽基;刘加波;庞耀珊;范晴 | 申请(专利权)人: | 广西壮族自治区兽医研究所 |
| 主分类号: | G01N33/577 | 分类号: | G01N33/577 |
| 代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
| 地址: | 530001 广西*** | 国省代码: | 广西;45 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 检测 h7 禽流感 病毒 胶体 试纸 | ||
1.一种用于检测H7亚型禽流感病毒胶体金免疫层析试纸条,包括支持板和放置在其上的样品垫、灌注有金标抗体的偶联垫、含有检测线T和质控线C的NC膜和吸水垫;
所述金标抗体为胶体金标记H7亚型禽流感病毒单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的试纸条,其特征在于:
所述胶体金的粒径为15-25nm。
3.根据权利要求1或2所述的试纸条,其特征在于:
所述检测线T由H7亚型禽流感病毒的多克隆抗体形成;
所述质控线C由鼠源抗lgG抗体形成。
4.根据权利要求1-3中任一所述的试纸条,其特征在于:
所述鼠源抗lgG抗体为兔抗鼠lgG;
所述H7亚型禽流感病毒的多克隆抗体为H7N2亚型禽流感病毒的多克隆抗体。
5.一种制备权利要求1-4中任一所述的试纸条的方法,包括如下步骤:
1)先将胶体金溶液和H7亚型禽流感病毒单克隆抗体混匀,反应,收集固体反应物,再将所述固体反应物经BSA封闭,即得到金标抗体;
2)制备灌注有金标抗体的偶联垫和含有检测线T和质控线C的NC膜;
所述灌注有金标抗体的偶联垫为将所述金标抗体灌注到玻璃纤维棉上、干燥,得到偶联垫;
所述含有检测线T和质控线C的NC膜为将H7亚型禽流感病毒多克隆抗体和鼠源抗lgG抗体分别点射于NC膜上,形成含有检测线T和质控线C的NC膜;
3)将所述NC膜、样品垫、所述偶联垫和吸水垫组装到支持板,得到胶体金免疫层析试纸条。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于:
步骤1)中,所述胶体金溶液和所述H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的加料体积比为200:1;
所述H7亚型禽流感病毒单克隆抗体的浓度为1mg/mL;
所述胶体金溶液中的胶体金的粒径为15-25nm;
所述反应为25℃搅拌30min;
所述胶体金溶液的pH值为9.0;
步骤2)中,所述鼠源抗lgG抗体为兔抗鼠lgG。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:
所述胶体金溶液按照如下方法制备:四氯金酸水溶液和柠檬酸钠水溶液混匀,反应,得到胶体金溶液;所述柠檬酸钠和所述四氯金酸的质量比为5:1;
所述四氯金酸水溶液的反应温度为97℃;
所述反应依次为A、B:A为97℃反应10min;B为25℃搅拌10min。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于:
所述H7亚型禽流感病毒多克隆抗体为H7N2亚型禽流感病毒多克隆抗体。
9.权利要求1-4所述的胶体金免疫层析试纸条在制备检测或辅助检测H7亚型禽流感病毒的试剂盒中的应用。
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