[发明专利]一种DAB2IP蛋白的ELISA检测方法

说明书

技术领域

本发明属于免疫学检测技术领域，特别是涉及一种DAB2IP蛋白的检测方法及其应用。 

背景技术

肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，其死亡率仅次于心脑血管疾病。全球每年罹患恶性肿瘤人数约有1000万人，其中因肿瘤死亡的病例达700多万，而肿瘤的转移和复发是肿瘤死亡的主要因素。近年来，我国每年新增肿瘤病患160-170万人，呈明显上升趋势。肿瘤治疗康复的关键在于肿瘤的及时准确诊断和治疗。因此，肿瘤诊断对于降低肿瘤病死亡率意义重大。肿瘤的诊断主要依靠检测肿瘤标志物来实现。同时，肿瘤标志物也是肿瘤的病理诊断、治疗和预后判断的重要指标。这些标志物存在于病人的细胞、组织、血液或体液中，检测这些肿瘤标志物的表达水平，对相关恶性肿瘤的早期诊断、治疗效果和预后转归判断等有重要参考价值。 

DAB2IP是一种新发现的抑癌蛋白，它与抑癌蛋白DAB2蛋白的N末端相结合，是DAB2下游的效应蛋白。DAB2IP最初发现与前列腺癌有关，其表达减少常在前列腺癌细胞中检测到，而在正常的前列腺细胞中则表达正常。另外，研究表明DAB2IP蛋白的表达与前列腺癌转移的分级和预后呈负相关，故监测低表达的DAB2IP对于前列腺癌的预测和诊治具有重要意义。Dote等发现DAB2IP的基因沉默对胃肠癌和乳腺癌的发生发展和侵袭转移起重要作用。Yano等认为DAB2IP可作为肺癌发生的一个生物标志物。而越来越多的研究表明DAB2IP作为重要的抑癌基因，在乳腺癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肺癌等多种肿瘤发生发展和预后等方面都发挥了举足轻重的作用。 

作为一种新发现的抑癌蛋白，关于DAB2IP的失活机制、抑癌机理及其与多种肿瘤的关系正在不断被深入研究。对DAB2IP的进一步研究，将为肿瘤诊断提供新途径，并有望成为治疗肿瘤的突破口之一。DAB2IP的去甲基化治疗，DAB2IP再表达和依据DAB2IP信号通路蛋白设计肿瘤抑制剂类药物，将为肿瘤治疗提供新的思路。 

因此，针对DAB2IP蛋白的检测方法一方面为临床肿瘤的辅助诊断、鉴别诊断、观察疗效、监测复发以及预后评价提供一个新的参考指标和检测工具；另一方面为全面揭示DAB2IP蛋白的作用机制以及与临床肿瘤的关系的研究提供了一个新手段。蛋白检测方法相对于核酸检测法，避免了蛋白表达的时空调控导致的误差，具有更直接准确的优势。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种人DAB2IP蛋白的检测方法。 

在一方面，本发明提供了一种DAB2IP蛋白的检测方法，所述方法包括以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体和标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体进行双抗体夹心法，以定量检测DAB2IP蛋白。优选地，所述DAB2IP单克隆抗体来自抗人肿瘤抑制因子DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏号为CCTCC No.C2013148。 

在一个具体的实施方案中，所述检测方法包括：以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体，以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体，通过显色剂-Avidin与多克隆抗体上的生物素结合使显色剂通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合，经显色，以定量检测实现DAB2IP蛋白。 

在一个实施方案中，所述显色剂是辣根过氧化物酶（HRP），在这种情况下经四甲基联苯胺（TMB）显色，在400-700nm，优选450nm单波长测定吸收值，以定量检测实现DAB2IP蛋白。 

本发明的方法为DAB2IP蛋白的检测及相关检测产品的开发奠定基础。 

在一个实施方案中，本发明的生物素标记的DAB2IP多克隆抗体是按以下步骤得到的： 

将DAB2IP多克隆抗体溶解在PBS缓冲液中（优选浓度2mg/ml），加入生物素（优选生物素为抗体分子数的1-40倍，更优选5-30倍，还更优选10-20倍），在冰上静置，经纯化得到纯的生物素化抗体。 

本发明中的DAB2IP单克隆抗体可以参见本申请人于2014年1月9日提交的，申请号为201410009739.9、发明名称为“一种抗人DAB2IP的单克隆抗体及其细胞株”的发明专利申请，其全文引入本文作为参考。