[发明专利]一种DAB2IP蛋白的ELISA检测方法

权利要求书

1.一种DAB2IP蛋白的检测方法，所述方法包括以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体和标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体进行双抗体夹心法，以定量检测DAB2IP蛋白。

2.权利要求1的方法，所述DAB2IP单克隆抗体来自抗人肿瘤抑制因子DAB2IP单克隆抗体杂交瘤细胞株，其保藏号为CCTCC No.C2013148。

3.权利要求1或2的方法，包括所述检测方法：以包被于ELISA检测板上的DAB2IP单克隆抗体作为固相抗体，以生物素标记的DAB2IP多克隆抗体作为酶标抗体，通过显色剂-Avidin与多克隆抗体上的生物素结合使显色剂通过与其偶联的Avidin与多克隆抗体上的生物素结合，经显色，以定量检测DAB2IP蛋白。

4.权利要求3的方法，所述显色剂是辣根过氧化物酶（HRP），在这种情况下经四甲基联苯胺（TMB）显色，在450nm单波长测定吸收值，以定量检测实现DAB2IP蛋白。

5.权利要求1或2的方法，所述生物素标记的DAB2IP多克隆抗体是按以下步骤制备的：

将DAB2IP多克隆抗体溶解在PBS缓冲液中（优选浓度2mg/ml），加入生物素（优选生物素为抗体分子数的1-40倍，更优选5-30，还更优选10-20倍），在冰上静置，经纯化得到纯的生物素化抗体。

6.权利要求1或2的方法，所述单克隆抗体是按以下步骤制备的：将DAB2IP基因重组到改造过的pET32a载体上，该载体同时含有6His tag和TRX tag，并在6His tag和多克隆位点之间含有TEV酶切位点；将重组质粒在大肠杆菌BL21菌株中进行表达，所表达的蛋白为TRX-6His-DAB2IP融合蛋白，经TEV酶切及二次镍柱和分子筛纯化，得到纯化的DAB2IP蛋白；利用该纯化的DAB2IP蛋白免疫小鼠，经细胞融合及亚克隆化得到单克隆抗体杂交瘤细胞株，由该细胞株分泌产生单克隆抗体。

7.权利要求1或2的方法，所述多克隆抗体是按以下步骤制备的：利用权利要求6纯化的DAB2IP蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。

8.权利要求1或2的方法，所述DAB2IP的定量检测是按以下方法完成的：将DAB2IP标准蛋白进行梯度稀释，然后分别用此方法测定400-700nm，优选450nm单波长时的读数，制作一个标准曲线，再将要测定的样品用此法在相同波长所测得的读数带入标准曲线，得到其实际浓度。