[发明专利]一种区分不同来源白藜芦醇的LC-QTOF分析方法

说明书

技术领域

本发明属于分析化学领域，提供了一种识别白藜芦醇原料来源的LC-QTOF（液相色谱/四级杆-飞行时间质谱联用）分析方法。

背景技术

白藜芦醇具有抗肿瘤、预防心血管疾病、免疫调节及抗菌等广泛的生物活性，它所具有的特殊保健功效使得其在市场上广受欢迎。随着白藜芦醇的生物活性逐渐被认识，越来越多的保健品生产企业都非常看好白藜芦醇的功能性，它作为终端产品的应用面有望不断拓宽。现阶段，国内外市场对白藜芦醇的需求量越来越大，白藜芦醇将会更加广泛、更安全的应用到各个领域当中。

通常白藜芦醇的来源有化学合成、微生物、生物合成及天然植物提取。化学合成能大量的生产白藜芦醇，但现阶段化学合成白藜芦醇的各种方法存在不同程度的环境污染等问题；而微生物发酵生物合成白藜芦醇技术的投入较大，在市场上尚未大规模形成产业化前景。因此市场上98%原料级白藜芦醇主要源自于天然植物虎杖中提取获得和合成获得，但市场上有5%-20%不同规格的产品分别来自虎杖和其他植物如葡萄藤等。

中药虎杖原材料本身含有少量的白藜芦醇，但其含有高达3%左右的虎杖苷，通过生物酵解的方法可以得到高含量的白藜芦醇，所以虎杖是工业生产白藜芦醇的极为重要的原材料。中药虎杖中白藜芦醇主要开发的产品规格为50%、98%，产品价格约为800-3000元/公斤左右，具有较为广阔的应用市场。但由于虎杖为中国传统药材中的一种，并非药食同源植物，在国外如日本，从虎杖中提取开发的白藜芦醇产品只能应用于医药领域，在食品行业中使用具有一定的法律瓶颈。

而葡萄藤来源的白藜芦醇含量相对较低（含量一般在几十到几百ppm），其产品的开发在我国相对滞后，但以药食同源植物-葡萄藤为原料开发的白藜芦醇相关产品其安全性在国际市场上能够得到更广泛地接受，可以在医药领域中使用，也可以广泛应用到诸如保健品、食品领域中。同时，葡萄藤中不仅含有白藜芦醇，而且还含有丰富的白藜芦醇低聚物，如ε-viniferin、α-viniferin、Miyabenol C等，这些白藜芦醇低聚物可以向单体转化，从而提高白藜芦醇的含量。葡萄藤中白藜芦醇产品生产规格一般为5%或15-20%，价格分别在200欧元/公斤和1000欧元/公斤左右，远高于传统的虎杖来源白藜芦醇产品价格，虽然价格昂贵，但受到健康食品制造商的青睐与欢迎。

不同植物来源生产的白藜芦醇产品价格的巨大差异导致市场上一些不法商家为获得高额利润以相对低廉的虎杖来源的白藜芦醇假冒较昂贵的葡萄藤来源白藜芦醇应用到保健品、食品领域中，市场上存在将高纯度的虎杖来源白藜芦醇添加到低纯度葡萄藤来源的白藜芦醇中的现象，从而导致消费者的身体健康受到一定程度的损害和威胁，也扰乱了相关产品的国际国内的市场秩序，引起不同程度的贸易纠纷。国际市场上明确规定，具有药用保健的产品不能添加到保健食品当中，因此，为保证民众身体健康、应对国际贸易壁垒，维护我国产品的国际声誉，维护国家经济社会稳定和国际贸易健康发展，亟待加强白藜芦醇产品原料来源的真实属性表征与识别技术研究。

目前应用得最多的白藜芦醇的分析检测方法如下：

（1）高效液相色谱法（HPLC）

白藜芦醇的极性较小，分析检测上普遍采用反相高效液相色谱进行分析，常采用乙腈-磷酸水、甲醇-冰乙酸等常用流动相分析。通用检测器包括紫外分光光度计、二级管阵列、电化学、荧光扫描检测等。吴波等人应用高效液相色谱荧光检测法建立了一种快速、灵敏、适用于水果中顺、反白藜芦醇及其苷的定量分析方法，此法已得到较好的应用。

（2）液质联用技术（LC-MS）

由于白藜芦醇与其衍生物结构相近，且白藜芦醇代谢物在植物体内含量较低，单一的分析技术一般难以获得准确的结果，因此液质联用技术成为用于分析此类复杂组分的重要手段之一，杨润涛等人以Lichrospher C18柱作为分析色谱柱，乙腈-水为流动相，采用电喷雾离子源，内标法定量以及多反应监测模式，在已选定的条件下，建立了对血浆中白藜芦醇苷及其代谢产物同时测定的LC-MS定量分析方法。LC-QTOF指的是液相色谱-四级杆-飞行时间质谱，LC-MS指的是液相色谱-单级质谱，LC-QTOF技术是一种近年才兴起的更先进、更可靠、更准确的质谱技术，能获得的化合物信息比LC-MS要多很多。

（3）气质联用技术（GC-MS）

栾天罡等人通过采用甲基硅烷化与固相微萃取技术（SPME）相结合的预处理方法，应用GC-MS技术对葡萄藤酒中的19种极性有机物和多酚类化合物进行定性分析，同时对反式白藜芦醇进行了定量分析。

（4）毛细管电泳法（CE）