[发明专利]异香豆素类新抗生素和田霉素（Hetiamacin）B、C、D 及其制备和应用

权利要求书

1.和田霉素（Hetiamacin）B、C、D，结构如式（1）、（2）、（3）所示：

（1）Hetiamacin B

（2）Hetiamacin C

（3）Hetiamacin D。

2.一种权利要求1所述的和田霉素（Hetiamacin）B、C、D的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

首先发酵培养保藏编号为CGMCC No.6688的枯草芽孢杆菌菌株（Bacillus subtilis subsp.inaquosorum）PJS；

然后从发酵物中提取、分离所述的和田霉素（Hetiamacin）B、C、D。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述发酵培养步骤为：将保藏编号为CGMCC No.6688的枯草芽孢杆菌菌株（Bacillus subtilis subsp.inaquosorum）PJS接种于种子培养基上培养，然后转入发酵培养基培养，培养成熟后收获发酵液。

4.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述提取、分离步骤包括：将发酵液离心后，上清滤液用大孔树脂HP-20吸附，经过不同比例的丙酮-水在大孔树脂HP-20上洗脱，除去丙酮的洗脱液冷冻干燥后得粗提物；粗提物经反向C18中压柱洗脱分离，LC-MS检测合并得到半纯品；半纯品溶于甲醇，用HPLC进行制备，除去甲醇的水溶液冷冻干燥，得到成品。

5.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，所述提取、分离步骤包括：发酵液经离心、布氏漏斗抽滤后，以3-4BV/h（倍柱体积/小时）的速度通过HP-20型大孔树脂，流出液弃去；用1-2BV体积的蒸馏水洗涤树脂层，再分别用2-3BV的30%、50%、80%丙酮-水溶液洗脱树脂，除去洗脱液中丙酮，获得的水溶液经冷冻干燥后分别获得30%丙酮-水溶液、50%丙酮-水溶液、80%丙酮-水溶液洗脱出的粉末状粗品；而后50%丙酮-水溶液洗脱的粉末状粗品用甲醇溶解，湿法上样于RP-C18中压柱，用甲醇-水进行分级梯度洗脱（30%甲醇-水溶液150mL，60%甲醇-水溶液200mL，90%甲醇-水溶液200mL），按5-6mL/管收集洗脱液；60%甲醇-水洗脱液进行LC-MS的检测，含相同成分的管合并后减压浓缩，得到分别含有不同目标化合物（MW=449或463）的半纯品；半纯品溶于甲醇，用HPLC进行制备，以48%甲醇-水溶液，2mL/min的流速进行等度洗脱，分别收集254nm紫外波长下出现在29min、26min、33min附近的色谱峰，除去甲醇的水溶液经冷冻干燥，得到白色或浅黄色粉末状的成品化合物即和田霉素（Hetiamacin）B、C、D。

6.如权利要求1所述的和田霉素（Hetiamacin）B、C、D及其组合物在制备抗生素药物中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述抗生素用于抗革兰氏阳性细菌感染。

8.如权利要求7所述的用途，其特征在于，所述细菌感染为革兰氏阳性菌葡萄球菌属及其耐药菌所造成的感染。

9.枯草芽孢杆菌在生产权利要求1所述的和田霉素（Hetiamacin）B、C、D中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌为保藏编号为CGMCC No.6688的枯草芽孢杆菌菌株（Bacillus subtilis subsp.inaquosorum）PJS。