[发明专利]油菜转基因检测试剂盒

说明书

所属技术领域

本发明涉及检测用品领域，具体为一种油菜转基因检测试剂盒。

背景技术

油菜是十字花科芸薹属植物，是转基因作物研究中研究最早、最多的一类农作物。1985 年, Ooms等利用农杆菌介导法培育成功第一例转基因甘蓝型油菜。此后各大跨国公司育成了多种转基因油菜品系，并于1995后陆续在北美、日本等地通过生物安全评估，批准商业化种植。截止2010年，全球转基因油菜种植面积已超过700 万hm²，占全球油菜总种植面积的23%，位列于转基因大豆、玉米、棉花之后，是世界第四位的转基因作物。油菜是重要的油料作物，我国目前食用油的一半以上来源于油菜。每年我国需要从北美地区进口300万吨以上的油菜籽，其中70%以上是转基因油菜籽。由于转基因产品在全球市场中的大量涌现，其环境和食品安全问题也引起国际性的高度关注。各国相继制定并出台了相应的法律法规，对转基因作物的环境释放和产品销售采取严格的管理措施。我国于2001年5月23日发布了国务院第304号令《农业转基因生物安全管理条例》，实现了对转基因生物的规范管理，并于2002 年3 月20 日起施行《农业转基因生物标识管理办法》，要求对包括转基因油菜在内的5 类转基因生物及其产品进行标识。因此，快速、准确、灵敏、廉价和相应通量的转基因产品检测技术是非常关键的。转基因产品的检测技术主要包括基于蛋白的检测方法和基于核酸的检测方法。酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫试纸条和Western杂交等方法是目前主要的基于蛋白的检测方法，其共同特点是需要通过一定的处理步骤从样品中释放出目标蛋白（抗原），然后利用抗体特异性的结合抗原蛋白，最后通过酶标或金属标偶联抗体与抗原抗体复合物结合，从而产生可检测的信号，该类方法的缺点是检测灵敏度相对较低，并且需要制备高特异性抗体，同时检测容易受到多种因素的影响，出现假阳性。而基于核酸的检测方法是目前最普遍、最准确的转基因检测技术，检测方法主要包括PCR（聚合酶链式反应）技术和基于分子杂交的基因芯片技术。目前仍以PCR技术应用最为广泛，其常用的技术方法包括普通定性PCR、巢式PCR、多重PCR、荧光定量PCR等方法。普通定性PCR方法检测效率低，尤其检测多基因对象时更加费时费力；巢式PCR虽然提高了检测的灵敏度，但同样存在检测效率的问题；多重PCR方法可以在一个反应中同时检测多个基因，但常规的电泳检测结果很难判断，容易出现假阳性和假阴性结果；荧光定量PCR方法灵敏度高，但其成本高，并且需要特殊检测仪器。基因芯片也是常用的转基因产品检测技术，目前一般采用玻璃片作为固相支持物，实验过程需要相应的点样仪和芯片识读仪，同样成本较高。因此研发一种快速、方便、灵敏、廉价、可视化和高通量的检测方法将具有非常好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术费时费力成本高的缺陷，提供一种操作简单，快速灵敏，检测通量大，检测结果可视化，成本低廉的油菜转基因检测试剂盒。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明的油菜转基因检测试剂盒由引物组合和膜芯片组成，其特征在于引物组合为11重双启动寡核苷酸引物（DPO）组合，各对引物的碱基序列5’-3’如下，其中碱基I为次黄嘌呤核苷酸：

EPSPS：正向引物： CTTTCTGGAACCGTCCGTATIIIIIGTGACAA

反向引物：CCAAGTATCACCTTCCTTACIIIIICTGGCAC；

GOX：正向引物：CTGCTGCTCCTAACTGGAAGIIIIITCACGTT

反向引物：GGTCATTGGAGCACCAGTCAIIIIIAGGTGAC；

PAT：正向引物： TGAGACGTCTACAGTGAACTIIIIIACAGAGC

反向引物：CTTCCAGGGCCCAGCGTAAGIIIIICCAGCCA；

NPTII：正向引物： CGAAGTGCCGGGGCAGGATCIIIIITCATCTC

反向引物：CGCGAGCCCCTGATGCTCTTIIIIIAGATCAT；

BAR：正向引物： GACGACCTCGTCCGTCTGCGIIIIIGCTATCC

反向引物：CAGCAGGTGGGTGTAGAGCGIIIIICCCAGTC；

BARNASE：正向引物： ATTATCGTGGATTTCCGTTTIIIIICTGGTGC

反向引物：GCTTATGATATGTCTGAAGAIIIIICGCAACC；