[发明专利]一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1

说明书

技术领域

 本发明涉及生物技术，尤其涉及内分泌干扰物潜在生物标志物vigilin的检测。

背景技术

卵黄蛋白原是卵生脊椎动物合成卵黄蛋白的前体，正常条件下，卵黄蛋白原只分布在性成熟雌性个体中；但当雄性个体以及幼体在受到环境中类雌激素作用时，也可以产生卵黄蛋白原，卵黄蛋白原是有效的类雌激素生物标志物，但它仅分布于卵生脊椎动物中，导致其作为生物标志物的使用受到很大的限制。Vigilin(目前还没有中文译文)分子量约为150 kDa，在物种间高度保守，与RNA结合发挥多种功能，它广泛分布于真核生物当中，已有文献报道，vigilin可以稳定卵黄蛋白原的mRNA使其不受核酸内切酶的降解，同时，vigilin也受雌激素的诱导，可能是潜在的生物标志物，能够应用于环境监测中。抗体是检测生物标志物的重要手段之一，目前已报道的识别vigilin的抗体有Chiu et al., High-density lipoprotein-binding protein (HBP)/vigilin is expressed in human atherosclerotic lesions and colocalizes with apolipoprotein E, Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology, 1997, 17(11): 2350-2358；Dodson et al., Vigilin, a ubiquitous protein with 14 K homology domains, is the estrogen-inducible vitellogenin mRNA 3'-untranslated region-binding protein, The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272(19): 12249-12252；以及Goolsby et al., RNAi-mediated depletion of the 15 KH domain protein, vigilin, induces death of dividing and non-dividing human cells but does not initially inhibit protein synthesis, Nucleic Acids Research, 2003, 31(19):5644-5653等，这些vigilin抗体都是多克隆抗体，其不足之处在于，它们只能专一地识别单种属的vigilin。

  噬菌体展示单链抗体主要通过将工程化的抗体可变区基因片段插入到噬菌体外壳蛋白基因中，达到抗体可变区与噬菌体外壳蛋白融合表达并展示于噬菌体表面的目的。通过几轮对目的抗原的淘选，目标抗体即可快速且廉价地获得，此单链抗体在大肠杆菌中表达分泌，可批量制备；另外，由于不需要免疫动物，通过噬菌体展示技术获得的单克隆抗体比多克隆抗体更加方便快捷。

发明内容

本发明的目的是提供一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1，该单链抗体P33D1通过噬菌体展示技术制备。本发明的优点在于，单链抗体P33D1可以特异性识别从鱼类到高等哺乳动物等多种脊椎动物vigilin。本发明成本低、制备简便、可大量制备，以单链抗体P33D1为分子工具，可进一步检测潜在生物标志物vigilin的表达以及研究其功能。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1的DNA序列为：