[发明专利]一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1

权利要求书

1.一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1的DNA序列为：

ATGGCCGAGGTGAAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAAGTTGTCCTGCACAGCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACTACTATATGCACTGGGTGAAGCAGAGGACTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGATCCTGAGGATGGTGAAACTAAATATGCCCCGAAATTCCAGGGCAAGGCCACTATAACAGCAGACACATCCTCCAACACAGCCTACCTGCAGCTCAGCAGCCTGACATCTGAGGACACTGCCGTCTATTACTGTGCTACGGGTAACTACGGCTATTACTATGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTGTCGACAGGTGGAGGCGGCTCTGGTGGCGGTGGCAGTGGCGGCGGAGGTTCTGACGTCGTGATGACCCAGTCTCCAACCACCATGGCTGCATCTCCCGGGGAGAAGATCACTATCACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTATAAGTTCCAATTACTTGCATTGGTATCAGCAGAAGCCAGGATTCTCCCCTAAACTCTTGATTTATAGGACATCCAATCTGGCTTCTGGAGTCCCAGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAATTGGCACCATGGAGGCTGAAGATGTTGCCACTTACTACTGCCAGCAGGGTAGTAGTATACCGCTCACGTTCGGTGCTGGGACCAAGCTGGAAATCAAGCGCGCGGCCGCAGGTGCGCCGGTGCCGTATCCGGATCCGCTGGAACCGCGTGCCGCA。

2.根据权利要求1所述的一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1，其特征在于，该单链抗体P33D1的氨基酸序列为：

MAEVKLQQSGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDYYMHWVKQRTEQGLEWIGRIDPEDGETKYAPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCATGNYGYYYAMDYWGQGTSVTVSTGGGGSGGGGSGGGGSDVVMTQSPTTMAASPGEKITITCSASSSISSNYLHWYQQKPGFSPKLLIYRTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTIGTMEAEDVATYYCQQGSSIPLTFGAGTKLEIKRAAAGAPVPYPDPLEPRAA。

3.实现权利要求1所述的一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1的制备方法，该方法包含下列步骤：

（1）选取斑马鱼vigilin碳末端的序列，将该序列克隆到pET28a载体中，在大肠杆菌BL21中表达重组vigilin蛋白，用His bind树脂纯化，将纯化后的vigilin重组蛋白固定在Ni-NTA HisSorb Plate上；

（2）将鼠源天然抗体噬菌体展示单链抗体文库拯救后，用重组vigilin蛋白对噬菌体展示单链抗体文库进行三轮淘选，得到单链抗体文库的菌液；

（3）将菌液涂在氨苄抗性的平板上，30℃培养至长出单菌落；

（4）对各单菌落用ELISA方法鉴定可特异识别重组vigilin蛋白的单链抗体阳性克隆菌株，选取A_450nm值较高的单链抗体阳性克隆菌株，将该克隆株命名为P33D1菌株；

（5）对P33D1菌株的单链抗体进行DNA测序，如果该DNA序列与权利要求1所述的一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1的DNA序列相同，进行步骤(6)；如果该DNA序列与权利要求1所述的一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1的DNA序列不同，返回步骤(1)；

（6）将P33D1菌株诱导表达为可溶性单链抗体P33D1；

（7）用Western Blot方法检测单链抗体P33D1对成年雄性和雌性斑马鱼肝脏、小鼠肝脏以及人的子宫颈癌细胞vigilin的识别，结果显示该单链抗体P33D1能够特异识别斑马鱼，小鼠以及人的vigilin；

（8）该单链抗体即为一种能识别多种脊椎动物vigilin的单链抗体P33D1。