[发明专利]一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于蜡样芽孢杆菌解磷能力探索技术领域，涉及一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基及发酵方法。

背景技术

磷是植物生长发育必需的营养元素，缺磷可导致农作物产量明显降低。土壤全磷含量虽然较高，但多以难溶态存在，难以被植物吸收利用。为了获得高产，生产上反复施用大量磷素化肥，其中大约70％转化为Ca-P，Fe-P和Al-P等难溶性化合物而储存在土壤中，这不仅耗竭有限的磷矿资源、造成环境污染，还会给食物安全和人类健康带来影响。

微生物肥料是指一类含有活微生物的特定制品，应用于农业生产中，作物能够获得特定的肥料效应，在这种效应的产生中，制品中活性微生物起关键作用。所以产品中必须要有足够数量的有效微生物存在，以保证在施入田间后能够作为优势菌种存活，具备抗逆、强竞争存活能力。而研究其最佳生长条件对于提高微生物的生物量具有十分重要的作用。

影响微生物生长的因素很多，总体可以分为营养条件和培养条件两方面。前者包括碳源、氮源、无机盐、生长因子和微量元素等，涉及它们的种类、浓度及相互之间的比例关系。后者包括温度、氧分压、pH、渗透压等因素。

解磷微生物是土壤中能够将无效磷转化为植物可以吸收利用的有效磷的一类特殊微生物功能群体，在自然及农业生态的磷素生物地化循环中起到了关键作用。解磷细菌是解磷微生物中重要的一类，通过活化土壤磷元素或影响植物根系分泌物的种类和数量，增加植物根系对K，Ca，Mg，Fe，Zn等营养元素的吸收，从而促进植物的生长发育。解磷细菌还通过分泌各种酶类或有机酸来活化土壤中的难溶态磷，并影响根际微生物的群落结构。大量研究表明，施用含有高效解磷细菌的微生物菌剂能显著促进植物生长、改善植株根际环境。

目前针对解磷细菌采用的发酵培养基为：葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄0.5g，NaCl0.3g，KCl0.3g，FeSO₄·7H₂O0.03g，MnSO₄·H₂O0.03g，MgSO₄·7H₂O0.3g，KH₂PO₄2.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5。这是一种广谱性的发酵培养基，而针对来自不同植物根际、不同种类的解磷细菌筛选出适宜的培养基，优化解磷细菌的培养条件，提高解磷细菌的解磷活性，对开发高效优质解磷菌剂、降低解磷细菌菌剂的生产成本，提高菌剂生产效率等具有重要的意义。

核桃是长江中上游地区退耕还林、水土保持常用的经济林之一。目前针对从核桃根际筛选出的高效解磷细菌的培养基以及相应的培养方法的研究还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于解决现有培养解磷细菌的培养基存在成本高、发酵后生物量低及不适合于发酵培养蜡样芽孢杆菌的问题，提供一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基及发酵方法。其具体技术方案为：

一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基，其配方为：蔗糖25～35g／L，NH₄Cl0.8～1.2g／L，NaCl0.3g，KCl0.3g，FeSO₄·7H₂O0.03g，MnSO₄·H₂O0.03g，MgSO₄·7H₂O0.3g，KH₂PO₄2.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.5。

一种提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基的发酵方法，括以下步骤：

步骤一：蜡样芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基上活化培养得到斜面菌种；

步骤二：将斜面菌种接种到液体种子培养基上培养，得到液体种子液；

步骤三：将步骤二获得的液体种子液接种到提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基上，搅拌培养，即得到蜡样芽孢杆菌液体菌剂。

进一步优选，步骤一中蜡样芽孢杆菌在牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养基上活化培养的温度为28℃，活化培养的时间为24h。

进一步优选，步骤一获得的液体种子液pH值为7.0。

进一步优选，步骤三中液体种子液接种到培养基的比例为：6％液体种子液：100mL培养基。

进一步优选，步骤三液体种子液接种到提高蜡样芽孢杆菌解磷能力的发酵培养基后搅拌速度为125r／min，温度为28℃，搅拌时间为56h。