[发明专利]一种利用RNA干扰技术防治中华蜜蜂囊状幼虫病的方法有效
| 申请号： | 201410037220.1 | 申请日： | 2014-01-26 |
| 公开（公告）号： | CN103751807A | 公开（公告）日： | 2014-04-30 |
| 发明（设计）人： | 夏晓翠;魏太云;周冰峰 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | A61K48/00 | 分类号： | A61K48/00;A61P31/14;C12N15/70;C12N15/113;C12N15/10 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 rna 干扰 技术 防治 中华 蜜蜂 幼虫 方法 | ||
1.一种利用RNA干扰技术防治中华蜜蜂囊状幼虫病的方法，其特征在于：其步骤包括以下：
（1）收集患中华蜜蜂囊状幼虫病的幼虫或蛹放置-80℃冰箱保存；
（2）中华蜜蜂囊状幼虫病毒复制基因-RNA依赖的RNA聚合酶基因的扩增：采用Trizol法提取患病幼虫的总RNA，用RdRp基因的下游引物进行反转录合成cDNA，PCR扩增目的基因片段，将该基因片段连接到PMD18-T载体，挑取含有该基因片段的单菌落送至华大基因公司进行序列测定；
（3）dsRdRp原核表达载体的构建，将（2）中扩增的目的片段，在T4连接酶的作用下连接至L4440载体，16℃连接过夜；将T4酶连接产物转入HT115感受态细胞中，涂布于含有100 μg/mL氨苄抗生素的LB固体培养基上；
（4）dsRdRp的诱导表达：将（3）中阳性克隆接种于LB液体培养基中，37℃震荡培养至OD595 = 0.5-0.6，加入异丙基硫代-β-D-半乳糖苷，即IPTG进行诱导，处理后37℃继续震荡培养4 h，收集菌液，采用CTAB法提取dsRdRp；
（5）dsRdRp的大量表达并添加懂到饲料中饲喂给蜜蜂幼虫。
2.根据权利要求1所述的一种利用RNA干扰技术防治中华蜜蜂囊状幼虫病的方法，其特征在于：所述的LB固体培养基配方为：胰蛋白胨，10 g；酵母提取物5 g；氯化钠，10 g；琼脂，15 g；用去离子水定容至1 L，121℃蒸汽灭菌20 min；所述LB液体培养基配方为：胰蛋白胨，10 g；酵母提取物5 g；氯化钠，10 g；用去离子水定容至1 L，121℃蒸汽灭菌20 min。
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