[发明专利]槲皮素‑3‑O‑脂肪酸酯的酶催化制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及药物化学技术领域，特别是指一种槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法及其应用。 

背景技术

槲皮素是一种重要的黄酮类化合物，几乎存在于所有具活血化瘀功效的中草药中，且毒副作用低，提取分离工艺成熟简单。槲皮素表现显著的抗血小板聚集活性，对ADP、AA、PAF、胶原、凝血酶诱导的血小板聚集都有明显的抑制作用。但目前没有抗血小板聚集的槲皮素类药物进行临床使用，这主要是由于槲皮素溶解性差，成药性差，生物利用度低。通过结构修饰对槲皮素的3位羟基进行酯化，引入脂肪酰基，改变大平面的分子构型和分子间的紧密排列，溶剂容易进入分子间隙，从而改善溶解性，同时保留活性基团（3’,4’邻二位羟基和7位羟基），可以改善成药性，提高药效。 

槲皮素-3-O-脂肪酸酯为具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。翟广玉等专利（中国专利201210113907.X）以芦丁为起始原料，经过苄基化、酸性条件下水解、酯化、催化氢解四步反应制备了槲皮素-3-O-酰基酯类化合物，反应步骤多，使用的苄基化试剂刺激性和毒性大，催化氢解反应有一定的危险性。因此需要改进。 

发明内容

本发明提出一种槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，具有反应条件温和、产率高，反应路线短、操作简便、后处理简单、便于工业化生产的特点，解决了现有技术中相应的技术问题。 

本发明的技术方案是这样实现的： 

槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，包括以下步骤： 

（1）将槲皮素加入到无水有机溶剂中，槲皮素的摩尔浓度为0.01～0.1mol/L，在10～100℃的条件下，碱性催化剂的催化作用下，与酸酐或酰氯酰化反应3～5小时得到槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯； 

（2）将所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯加入到无水有机溶剂中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩尔浓度为0.002～0.04mol/L，在20～80℃的条件下，脂肪酶Lipozyme IM的催化作用下，与正丁醇发生醇解反应30～100小时得到槲皮素-3-O-脂肪酸酯； 

所述无水有机溶剂选自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和甲基叔丁基醚中的一种或几种； 

所述碱性催化剂选自三乙胺、吡啶和Na₂CO₃中的一种或几种； 

所述脂肪酶Lipozyme IM选自Lipozyme IM-20、Lipozyme IM-60中的一种； 

所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯为具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。 

作为对上述技术方案的改进，步骤（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和碱性催化剂的摩尔比为1：5～15：5～15；步骤（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme IM的质量比为1：0.5～3，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩尔比为1：4～12。 

作为对上述技术方案的改进，步骤（1）中，所述槲皮素的摩尔浓度为0.022mol/L，反应温度为25℃，反应时间为3.5～4.5小时；步骤（2）中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩尔浓度为0.008～0.02mol/L，反应温度为45℃，反应时间为45～96小时。 

作为对上述技术方案的改进，步骤（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和碱性催化剂的摩尔比为1：10：10；步骤（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme IM的质量比为1：1，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩尔比为1：10。 

作为对上述技术方案的改进，步骤（1）中，用GF254硅胶薄层层析板监测反应时间，展开剂为乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，体积比），至槲皮素斑点消失时酰化反应终止。 

作为对上述技术方案的进一步改进，步骤（1）中，酰化反应终止后，反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液、饱和碳酸钠水溶液洗涤，收集有机层，并用去离子水洗涤至中性，加入无水Na₂SO₄脱水，静置10～12小时，过滤得滤液，滤液在20kPa,40～70℃下减压旋蒸除去无水有机溶剂得槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯。