[发明专利]槲皮素‑3‑O‑脂肪酸酯的酶催化制备方法及其应用

权利要求书

1.槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将槲皮素加入到无水有机溶剂中，槲皮素的摩尔浓度为0.01～0.1mol/L，在10～100℃的条件下，碱性催化剂的催化作用下，与酸酐或酰氯酰化反应3～5小时得到槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯；

（2）将所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯加入到无水有机溶剂中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩尔浓度为0.002～0.04mol/L，在20～80℃的条件下，脂肪酶Lipozyme IM的催化作用下，与正丁醇发生醇解反应30～100小时得到槲皮素-3-O-脂肪酸酯；

所述无水有机溶剂选自乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷和甲基叔丁基醚中的一种或几种；

所述碱性催化剂选自三乙胺、吡啶和Na₂CO₃中的一种或几种；

所述脂肪酶Lipozyme IM选自Lipozyme IM-20、Lipozyme IM-60中的一种；

所述酸酐为乙酸酐；

所述酰氯为丙酰氯、正丁酰氯或正戊酰氯；

所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯为具有通式（Ⅰ）的化合物，式中R=C1-C4烷基。

2.如权利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和碱性催化剂的摩尔比为1：5～15：5～15；

步骤（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme IM的质量比为1：0.5～3，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩尔比为1：4～12。

3.如权利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述槲皮素的摩尔浓度为0.022mol/L，反应温度为25℃，反应时间为3.5～4.5小时；

步骤（2）中，槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯的摩尔浓度为0.008～0.02mol/L，反应温度为45℃，反应时间为45～96小时。

4.如权利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（1）中，所述槲皮素、酸酐或酰氯和碱性催化剂的摩尔比为1：10：10；

步骤（2）中，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和脂肪酶Lipozyme IM的质量比为1：1，所述槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯和正丁醇的摩尔比为1：10。

5.如权利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（1）中，用GF254硅胶薄层层析板监测反应时间，展开剂为乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，体积比），至槲皮素斑点消失时酰化反应终止。

6.如权利要求5所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（1）中，酰化反应终止后，反应液依次用1mol/L的盐酸水溶液、饱和碳酸钠水溶液洗涤，收集有机层，并用去离子水洗涤至中性，加入无水Na₂SO₄脱水，静置10～12小时，过滤得滤液，滤液在20kPa,40～70℃下减压旋蒸除去无水有机溶剂得槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯。

7.如权利要求1所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（2）中，用GF254硅胶薄层层析板监测反应时间，展开剂为乙酸乙酯/丙酮/冰乙酸（6：6：1.5，体积比），至槲皮素-3,5,7,3’,4’-五脂肪酸酯斑点消失时醇解反应终止。

8.如权利要求7所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：步骤（2）中，过滤除去脂肪酶Lipozyme IM终止醇解反应，滤液在20kPa,40～70℃下减压旋蒸除去无水有机溶剂，所得粗品经聚酰胺色谱柱纯化后得槲皮素-3-O-脂肪酸酯。

9.如权利要求1～8任一项所述的槲皮素-3-O-脂肪酸酯的酶催化制备方法，其特征在于：所述槲皮素-3-O-脂肪酸酯应用于制备抗血小板聚集的药物。