[发明专利]一株米曲霉PRB-1菌株

说明书

技术领域

本发明涉及工业微生物技术领域。更具体地，涉及一株米曲霉PRB-1菌株。

背景技术

酱油属于传统发酵调味食品，菌种是发酵的基础，其性能对酱油产量和质量影响甚大。米曲霉（Aspergillus oryzae）是酿造酱油中必不可少的微生物，也是酿造酱油生产过程中的核心技术。酱油酿造主要依赖于米曲霉所产生的丰富的酶系，来分解原料中的多种成分，从而形成酱油独特的色、香、味、体。酱油生产米曲霉菌种的生产性能决定了酱油的品质及原料利用率，优良米曲霉菌种的选用能够提高原料的利用率，缩短发酵周期，降低生产成本，提高酱油的风味和品质，因此，酱油酿造选育优良的米曲霉菌株至关重要，它关系到酱油的产量和质量。

目前，我国酱油酿造企业90%以上使用的是米曲霉（Aspergillus oryzae）沪酿3.042，该菌种具有生长快、产孢子多、酶系丰富、中性蛋白酶活性高等优点，是酱油酿造的主要菌种。然而，随着发酵时间的延长，其蛋白酶活力迅速下降，导致酿造酱油的原料蛋白利用率和氨基酸转化率偏低，产品风味较弱。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有用于酿造酱油的米曲霉的不足，提供一株优良的、孢子丰富、蛋白酶活高、发酵酱油产量高、质量好的米曲霉菌株。

本发明的另一目的是提供所述米曲霉PRB-1菌株的培养方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

    本发明提供了一株米曲霉（Aspergillus oryzae）菌株，所述菌株为米曲霉PRB-1菌株，该菌株于2013年12月4日保藏于中国典型培养物保藏中心（地址为中国武汉市武汉大学），保藏编号为CCTCC NO：M 2013628。

 所述的米曲霉PRB-1菌株属于曲霉目、曲霉科、曲霉属。

 所述的米曲霉PRB-1菌株的形态学特征描述如下：

菌落呈圆形，质地疏松，菌落中间部位着生孢子多，孢子粗壮，菌丝层厚；菌落生长初期小、白色、圆形，随着菌落的逐渐长大，白色范围也逐渐扩大，菌丝层变厚，菌落的中心开始着生浅黄绿色的孢子，然后浅黄绿色逐步向四周扩散；菌落成熟后孢子呈黄绿色，孢子粗壮，菌丝层厚。

上述米曲霉PRB-1菌株是从广东珠江桥生物科技股份有限公司的酱油种曲中，经过大量的复壮筛选、分离、纯化获得的。

具体地，本发明所述米曲霉PRB-1菌株的分离获得方法如下：

S1.分离复壮：取广东珠江桥生物科技股份有限公司酿造酱油种曲，无菌操作，制备成孢子悬液，按照10倍梯度稀释法，分别用无菌生理盐水将孢子悬液稀释到10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6的浓度，得孢子稀释液；取所述孢子稀释液涂布于复壮分离培养基平板上进行培养；挑选其中菌落生长快、透明圈大、菌落大、孢子多的菌株进行进一步的纯化；

S2.纯化：将S1挑选的菌落生长快、透明圈大、菌落大、孢子多的单菌落孢子接种于改良豆汁固体培养基上进行培养，待长出单菌落，即获得纯菌株；

S3.鉴定：根据菌株的形态学特征进行初步鉴定，所述米曲霉菌株的形态学特征描述如下：

菌落呈圆形，质地疏松，菌落中间部位着生孢子多，孢子粗壮，菌丝层厚；菌落生长初期小、白色、圆形，随着菌落的逐渐长大，白色范围也逐渐扩大，菌丝层变厚，菌落的中心开始着生浅黄绿色的孢子，然后浅黄绿色逐步向四周扩散；菌落成熟后孢子呈黄绿色，孢子粗壮，菌丝层厚；

S4.筛选：对上述培养得到的纯菌株进行扩大培养以及生产试产，筛选出一株生长速度快，种曲和成曲的孢子丰富，孢子发芽率高，蛋白酶活最高的菌株。该菌株命名为米曲霉PRB-1菌株，已于2013年12月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2013628，保藏地址为中国武汉市武汉大学。

其中，S1所述的复壮分离培养基平板为酪蛋白豆汁平板，其配制方法为：称取干酪素4g，KH₂P0₄ 0.36g，无水MgSO₄ 0.50g，Na₂HPO₄ 1.07g，大豆提取物2.0g，琼脂粉20.0g，溶于1000mL蒸馏水，调pH值至 6.5～7.0，分装，0.1MPa、121℃灭菌20min。