[发明专利]抗CA50单克隆抗体产生的杂交瘤及化学发光免疫分析试剂盒的制备

说明书

【技术领域】

本发明涉及CA50单克隆抗体产生的杂交瘤及检测血清中CA50含量的试剂盒，可广泛应用在医学和及生物化学技术领域。 

【背景知识】

CA50是一种广谱的肿瘤标志物，主要分布于糖脂及高分子蛋白中，不同肿瘤血清CA50阳性率不同。胰腺、肝脏、结肠、直肠等消化道恶性肿瘤患者中CA50阳性率较高。CA50在血清中的含量与肿瘤组织的大小、转移与否及病情严重程度有直接的定量关系，是用于胰腺癌早期诊断的一个有效指标。CA50广泛存在于上皮组织肿瘤中，CA50在血清中的含量与肿瘤组织的大小、转移及病情的严重程度有着直接的定量关系，是胰腺癌早期诊断的一种有效手段。有研究表明，胰腺癌患者血清CA50的含量明显高于正常组，而且其特异性较高。 

CA50与CA199同属糖类蛋白抗原，与CA199有交叉免疫性，胰腺癌患者CA50检出率约为50%。约10%的胰腺癌患者不产生CA199，仅产生CA50，CA50和CA199联合检测可修正部分CA199的假阴性结果。相关研究结果显示，联合检测的敏感性和特异性均高于单一检测。因此，CA50和CA199联合检测可提高胰腺癌的检出率，有助于胰腺癌的早期诊断、疗效观察及复发预测。此外CA50和CA199与其他肿瘤标志物CEA及CA242的联合检测对胰腺癌诊断的特异性和敏感性高，具有较高临床价值。 

【发明内容】

本发明的目的在于提供一种抗CA50单克隆抗体产生的杂交瘤以及建立一种简单且具高灵敏度的检测CA50的方法，并将该方法应用胰腺癌的早期筛查。以解决现有的单克隆抗体检测CA50的灵敏度不够或价格昂贵，不适合临床大规模的应用的缺点。 

本发明的另一目的在于提供一种CA50化学发光免疫分析测定试剂盒以及该试剂盒的制备方法。利用该试剂盒分析检测灵敏度高、特异性强。 

本发明获得了能够产生特异性识别CA50的单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞株11-1与杂交瘤细胞株2-1，此2株细胞株分别在2014年1月19日保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏地址是，中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:C201417与CCTCC NO:C201418。此外，经过鉴定，两株单克隆抗体分别识别CA50的两个不同表位，通过11-1与2-1的结合建立了双抗体夹心酶联免疫反应方法，其是一种高灵敏度及高通量的检测系统。 

因此，本发明提供了下面所述的1至7的内容： 

1.抗CA50的杂交瘤细胞株，其保藏号分别为CCTCC NO:C201417和CCTCC NO:C201418。 

2.抗CA50的单克隆抗体，分别由保藏号为CCTCC NO:C201417和CCTCC NO:C201418的杂交瘤细胞系所分泌，所述单克隆抗体命名为11-1和2-1。 

3.如权利要求2所述的抗CA50单克隆抗体的应用，即利用所述的单克隆抗体的双抗体夹心法ELISA检测CA50，夹心法两两配对的抗体来源于保藏号为CCTCC NO:C201417杂交瘤分泌的抗体11-1和保藏号为CCTCC NO:C201418杂交瘤分泌的抗体2-1，其步骤包括： 

（1）以所述的两两配对的单克隆抗体11-1包被； 

（2）加入待测样品孵育； 

（3）以所述的两两配对的HRP标记的另一株单克隆抗体2-1作为二抗，加入反应体系； 

（4）洗涤后加入酶反应底物，以450nm读取OD值； 

（5）结果表明检测的灵敏度很高。 

4.一种检测血清中CA50含量的试剂盒，包括:包被有抗CA50单克隆抗体11-1的不透明聚苯乙烯板；CA50抗原系列标准品；酶标记的CA50单克隆抗体2-1；上述酶所作用的化学发光底物A液和B液以及洗涤液。 

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：不透明聚苯乙烯板采用直接物理吸附法包被单克隆抗体11-1，包被液是碳酸盐缓冲液；另一株CA50单克隆抗体2-1和辣根过氧化酶偶联形成酶标记抗体，采用的是改良的过碘酸钠法进行标记；CA50抗原系列标准品以小牛血清为基质，加入CA50抗原纯品配置而成；发光底物A、B为HRP-Luminol发光体系。