[发明专利]抗CA50单克隆抗体产生的杂交瘤及化学发光免疫分析试剂盒的制备

权利要求书

1.抗CA50的杂交瘤细胞株，其保藏号分别为CCTCC NO：C201417和CCTCC NO：C201418。 

2.抗CA50的单克隆抗体，分别由保藏号为CCTCC NO:C201417和CCTCC NO:C201418的杂交瘤细胞系所分泌，所述单克隆抗体命名为11-1和2-1。 

3.如权利要求2所述的抗CA50单克隆抗体的应用，即利用所述的单克隆抗体的双抗体夹心法ELISA检测CA50，夹心法两两配对的抗体来源于保藏号为CCTCC NO:C201417杂交瘤分泌的抗体11-1和保藏号为CCTCC NO:C201418杂交瘤分泌的抗体2-1，其步骤包括： 

（1）以所述的两两配对的单克隆抗体11-1包被； 

（2）加入待测样品孵育； 

（3）以所述的两两配对的HRP标记的另一株单克隆抗体2-1作为二抗，加入反应体系； 

（4）洗涤后加入酶反应底物，以450nm读取OD值； 

（5）结果表明检测的灵敏度很高。 

4.一种检测血清中CA50含量的试剂盒，包括:包被有抗CA50单克隆抗体11-1的不透明聚苯乙烯板；CA50抗原系列标准品；酶标记的CA50单克隆抗体2-1；上述酶所作用的化学发光底物A液和B液以及洗涤液。 

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：不透明聚苯乙烯板采用直接物理吸附法包被单克隆抗体11-1，包被液是碳酸盐缓冲液；另一株CA50单克隆抗体2-1和辣根过氧化酶偶联形成酶标记抗体，采用的是改良的过碘酸钠法进行标记；CA50抗原系列标准品以小牛血清为基质，加入CA50抗原纯品配置而成；发光底物A、B为HRP-Luminol发光体系。 

6.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：标记抗体所用的标记酶是辣根过氧化酶，用的是高碘酸钠氧化法，所得酶标记抗体最佳的工作浓度是1：4000；包被有抗CA50抗体的不透明聚苯乙烯板采用的是直接物理吸附法包被；发光液A液用硼砂7.99g，硼酸3.46g，鲁米诺0.28g，对碘苯酚0.07g，加工艺用水定容至700mL，避光保存；发光底物B液由下列成分组成：硼砂7.99g，硼酸3.46g，过氧化脲0.07g加工艺用水定容至700mL。 

7.如权利要求4-6所述试剂盒的制备方法，包括以下步骤: 

（1）标准品的配制和浓度的校正 

将CA50抗原纯品，加入标准品稀释液，配制一高浓度标准品浓液，采用逐低稀释的方法稀释到各浓度，配制成0、5、20、100、250、500U/mL的系列标准品，标准品用国家标准品校正。 

（2）包被 

采用0.2mol/L，pH值为9.5的0.2M碳酸盐缓冲液与CA50单抗混合成抗体浓度是2μg/mL包被液，以100μL/孔包被在不透明的聚苯乙烯板上，4℃孵育过夜； 

（3）洗板 

用PBS-T洗液洗板孔2次； 

（4）封闭 

封闭液包含NaCl8.00g，KCl0.20g，Na₂HPO₄·12H₂O2.90g，KH₂PO₄0.20g，蔗糖20.00g，proclin3001.00mL，BSA20.00g，封闭液的PH值为7.3-7.5，150μL/孔封闭，湿盒放置孵育3h； 

（5）干燥 

去除封闭液，过夜干燥。 

（6）组装为成品 

将聚苯乙烯板子放入铝箔袋中并放入干燥剂，密封保存。