[发明专利]一种兽药残留的检测方法

权利要求书

1.一种兽药残留的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）样品的处理：

将待测样品进行前处理，加入提取剂后进行匀浆，匀浆之后进行超声提取，之后进行第一次离心分离得到上清液，用氮气将上清液吹干后得到的残余物用初始流动相溶解，混匀，之后进行第二次离心分离得到上清液，取上清液进行微孔滤膜过滤得到的滤液用于UPLC-MS/MS测定；

（2）兽药残留的测定

将步骤（1）得到的样品进行超高效液相色谱与质谱联用的测定，测定条件如下：

色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C₁₈柱；流动相为甲醇和甲酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱；

质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)；源温为105℃-115℃；脱溶剂温度为340℃-360℃；脱溶剂气流速度为600L·h^-1-700L·h^-1；锥孔反吹气流速度为45L·h^-1-55L·h^-1。

2.如权利要求1所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素类药物、β受体激动剂类药物、喹诺酮类药物和/或磺胺类药物。

3.如权利要求1或2所述的兽药残留的检测方法，其中所述兽药为四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、特步他林、西马特罗、沙丁胺醇、菲诺特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、克伦特罗、妥布特罗、喷布洛尔、苯乙醇胺A、培氟沙星，环丙沙星，恩诺沙星，氧氟沙星，伊诺沙星、吡哌酸、萘啶酸、西诺沙星、诺氟沙星、达氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、沙氟沙星、司帕沙星、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基噁唑、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺甲噁唑、磺胺氯达嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺醋酰、磺胺二甲异噁唑、磺胺苯吡唑、磺胺二甲氧嘧啶和/或磺胺喹噁啉中的一种、几种或全部。

4.如权利要求1-3任一项所述的兽药残留的检测方法，步骤（2）所述梯度洗脱程序为：

0-10.0min：甲醇的体积比为3.0％-90.0%；

10.0-10.1min：甲醇的体积比为90.0％-3.0％；

10.1-13.0min：甲醇的体积比为3.0％。

5.如权利要求1-4任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述氮气吹干上清液的温度为25℃-35℃，优选在30℃下进行。

6.如权利要求1-5任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述第一次离心和第二次离心的转速为9000r·min^-1-11000r·min^-1，离心的时间为8min-12min，优选所述第一次离心和第二次离心的转速为10000r·min^-1，离心的时间为10min。

7.如权利要求1-6任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述提取剂为10%三氯乙酸水溶液与乙腈的混合溶液；优选两者的体积比例为10%三氯乙酸水溶液：乙腈=（15～25）：（75～85）；更优选两者的体积比例为10%三氯乙酸水溶液：乙腈=20：80。

8.如权利要求1-7任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（1）所述在第一次离心分离后得到上清液的同时得到沉淀，对沉淀进行再次提取和分离，得到上清液与第一次离心分离得到的上清液进行合并，将合并后的上清液进行下一步骤的氮气吹干。

9.如权利要求1-8任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（2）的甲酸水溶液的体积浓度为0.04％-0.07％，优选体积浓度为0.05％。

10.如权利要求1-9任一项所述的兽药残留的检测方法，其中步骤（2）所述色谱条件：色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C₁₈柱；流动相为甲醇和甲酸水溶液，洗脱方式为梯度洗脱；流速为0.25mL·min^-1；柱温为30℃。

质谱条件：电喷雾离子源(ESI+)；毛细管电压为3.5KV；锥孔电压为3.0V；RF透镜电压为0.5V；源温为110℃；脱溶剂温度为350℃；脱溶剂气流速度为650L·h^-1；锥孔反吹气流速度为50L·h^-1。