[发明专利]金黄色葡萄球菌肠毒素B的B细胞免疫优势表位肽及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，特别是涉及来自金黄色葡萄球菌肠毒素B的三个B细胞免疫优势表位、鉴定此B细胞免疫优势表位的方法以及其在医药生物技术领域的应用。 

背景技术

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，S.aureus），作为革兰氏阳性菌的代表，是一类在自然界广泛存在的致病性球菌，也是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。调查研究表明，在美国，社区皮肤及软组织感染最常见的病原菌为S.aureus（约占75%）；在日本，脓疱病中S.aureus引发的大疱性脓包病占的92%；在非洲，热带脓性肌炎病原体中S.aureus占55%～72%；在中国，感染性心内膜炎的头号致病菌为S.aureus（占31%～34%）。此外，S.aureus感染以急性、化脓性为特征，局部可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身可导致骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、肺炎、脓毒血症等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金葡菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。 

金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧。28℃～38℃均能生长，最适温度为37℃，pH为4.8～9.4，最适为7.4。耐盐性强，在含10%～15%氯化钠培养基中均能生长。在血脂平板上形成的菌落较大，菌落周围形成明显的全透明溶血环（β-溶血），溶血性菌株具有较强致病性。按照噬菌体分型，金黄色葡萄球菌可分为5群26个型。噬菌体分型在流行病学调查时追踪传染源及研究菌型与疾 病种类间的关系上均有重要意义。肠毒素型食物中毒由Ⅲ和Ⅳ群金黄色葡萄球菌引起，Ⅱ群菌对抗生素产生耐药性的速度比Ⅰ和Ⅳ群缓慢很多。造成医院感染严重流行的是Ⅰ群中的52、52A、80和81型菌株。引起疱疹性和剥脱性皮炎的菌株经常是Ⅱ群71型。 

金黄色葡萄球菌耐热性肠毒素（Staphylococcal enterotoxin，SE），是引起人类食物中毒、全身炎症反应和脓毒症休克的主要原因，也是金黄色葡萄球菌疫苗研究最重要的保护性抗原之一。SE因血清型差异SE分为SEA、SEB及SEC等多种型，每株临床MRSA分离株可分泌1-2种肠毒素，其中SEB，SEC及TSST-1最丰富。每株金黄色葡萄球菌能产生一型或两型以上的肠毒素。近年发现，造成医院感染的耐甲氧西林金葡菌，80％以上产生肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B，SEB）。个别医院分离株几乎100％产SEB。 

金葡菌SEB属于超抗原，不需要抗原呈递细胞的加工处理，以完整的蛋白质分子直接与在MHCⅡ类分子的α₁结构域和TCR的β链V区结合，从而刺激T细胞活化增殖，释放大量细胞因子如IL-2、IFN-γ及TNF-α。由金葡菌SEB引起的中毒性休克综合征的病死率可达50%，而与流感并发的金葡菌SEB感染其死亡率可达90%以上，因此，气溶胶中的金葡菌SEB是一种潜在的生化武器。当SEB进入机体后，其超抗原的结合引起单个核细胞活化，导致广泛的细胞因子释放，而早期的TCR-αβT细胞释放的TNF-α对死亡的发生起了重要的作用。 

经Blast比对证实，SEB在MRSA各菌株中序列保守，结构稳定。在小鼠模型中的研究证实，SEB具有比其他抗原更好的体液应答优势，合成的人SEB单克隆抗体可预防MRSA感染常见的毒性休克综合症。但SEB本身为毒素，用于人体存在安全隐患，因此，失去毒性的突变体SEB是MRSA疫苗较好的保护性抗原。目前，SEB突变体疫苗用于SEB中毒及抗MRSA感染已在动物模型中获得成功。