[发明专利]一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从植物中提取高纯度ε-葡萄素的方法，尤其涉及一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法。

背景技术

近年来的国内外研究发现，葡萄枝蔓中含有丰富的ε-葡萄素。ε-葡萄素是葡萄与葡萄酒中重要功能成分白藜芦醇聚合而成的一种天然多酚。ε-葡萄素和白藜芦醇一样具有抗癌、抗氧化、预防心血管疾病、抗菌、消炎等作用，并且其活性和稳定性都高于白藜芦醇。因而在植物抗病、人体生理活性领域备受关注。葡萄在栽培过程中每年需修剪若干次，保守估计每亩年产100-200kg修剪废枝。长期以来，大多废枝被农户直接燃烧，严重污染环境。因此，从修剪废枝中开发天然产物，不但可以节约资源，而且能够获得安全的天然产物。

近几年来，国外对ε-葡萄素的功能活性研究较多，已有相关的葡萄藤提取物产品上市，上市产品中芪化物含量30-50%，其中ε-葡萄素含量为10-20%。

国内对ε-葡萄素的研究较少，能查到的专利仅有桂林莱茵生物科技股份有限公司的“一种通过发酵提高含有葡萄素植物中葡萄素含量的方法（申请号为200810097510.x）”和“一种芪族化合物及含有其的葡萄植物提取物及提取方法（申请号为200710302004.5）”。在申请号为200810097510.x的专利主要研究的是如何通过发酵提高葡萄素含量；在申请号为200710302004.5的专利中主要研究的是通过提取、纯化、精制得到主要产品为葡萄素和/或三聚体芪化物；但由于葡萄素和三聚体芪化物有多种结构式，所以其产品应该是多种葡萄素的复合物和多种三聚体芪化物的复合物。至于如何获得高纯度（纯度>98%）ε-葡萄素，至今国内外还未有相关制备和/或提取方法的相关研究报道。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，所得产品中ε-葡萄素的纯度≥98%。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，包括下述步骤：

步骤一 分离白藜芦醇、ε-葡萄素

将白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物溶于氯代甲烷后，进行柱层析，层析时，采用由氯代甲烷与甲醇组成的混合溶液进行梯度洗脱，得到含有ε-葡萄素粗品的洗脱液；

步骤二 精制

将步骤一所得含有ε-葡萄素粗品的洗脱液在小于60℃浓缩、干燥得到ε-葡萄素粗品，将ε-葡萄素粗品溶于甲醇后采装入羟丙基葡聚糖凝胶柱，进行柱层析，层析时，采用甲醇为洗脱液进行等度洗脱，得到含ε-葡萄素的洗脱液，静置，结晶，离心，得到ε-葡萄素单体。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，步骤一中，进行柱层析时，所用层析柱为氧化铝层析柱或硅胶层析柱，优选为硅胶层析柱；所述硅胶层析柱中硅胶颗粒的大小为200-300目。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，步骤一中所述氯代甲烷为二氯甲烷或三氯甲烷。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，步骤一中，层析装柱时，采用湿法上样，洗脱时，先用2-4BV的、由氯代甲烷与甲醇按体积比19:1组成的混合溶液进行第一次洗脱并收集第一次洗脱的洗脱液，再用2-4BV的、由氯代甲烷与甲醇按体积比16:1组成的混合溶液进行第二次洗脱并收集第二次洗脱的洗脱液，然后用2-4BV的、由氯代甲烷与甲醇按体积比13:1组成的混合溶液进行第三次洗脱并收集第三次洗脱的洗脱液，最后用2-4BV的、由氯代甲烷与甲醇按体积比10:1组成的混合溶液进行第四洗脱并收集第四次洗脱液；洗脱时，控制洗脱液的流速均0.5-1.5BV/h；所述第一次洗脱的洗脱液和第二次洗脱的洗脱液为含白藜芦醇的洗脱液；所述第三次洗脱的洗脱液和第四次洗脱的洗脱液为含ε-葡萄素的洗脱液。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，步骤一中洗脱层吸柱时，每次洗脱所用洗脱液优选为3BV，每次洗脱时，洗脱液的流速优选为1BV/h。

本发明一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，精制时一般采用下述方案：