[发明专利]一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法

权利要求书

1.一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于包括下述步骤：

步骤一 分离白藜芦醇、ε-葡萄素

将白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物溶于氯代甲烷后，进行柱层析，层析时，采用由氯代甲烷与甲醇组成的混合溶液进行梯度洗脱，得到含有ε-葡萄素粗品的洗脱液；

步骤二 精制

将步骤一所得含有ε-葡萄素粗品的洗脱液在温度低于60℃下，进行浓缩、干燥得到ε-葡萄素粗品，将ε-葡萄素粗品溶于甲醇后采用羟丙基葡聚糖凝胶柱，进行柱层析，层析时，采用甲醇为洗脱液进行等度洗脱，得到含ε-葡萄素的洗脱液，静置，结晶，离心，得到ε-葡萄素单体。

2.根据权利要求1所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：步骤一中，进行柱层析时，所用层析柱为氧化铝层析柱或硅胶层析柱；所述硅胶层析柱中硅胶颗粒的大小为200-300目。

3.根据权利要求1所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：步骤一中所述氯代甲烷为二氯甲烷或三氯甲烷。

4.根据权利要求1所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：步骤一中，层析装柱时，采用湿法上样；洗脱时，洗脱液由氯代甲烷与甲醇组成，采用梯度洗脱方式，依次按洗脱液中氯代甲烷与甲醇的体积比为19:1、16:1、13:1、10:1进行洗脱；洗脱液中氯代甲烷与甲醇的体积比为19:1、16:1时，收集得到含白藜芦醇的洗脱液；洗脱液中氯代甲烷与甲醇的体积比为13:1、10:1时，收集得到的为含ε-葡萄素的洗脱液；每次洗脱时，洗脱液的用量为2-4BV；洗脱时，控制洗脱液的流速均0.5-1.5BV/h。

5.根据权利要求1所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于，所述步骤二中：

含有ε-葡萄素粗品的洗脱液浓缩、干燥温度为40-50℃，得到的ε-葡萄素粗品溶于甲醇后，采用湿法上样的方式装入羟丙基葡聚糖凝胶柱中，进行柱层析，得到的含ε-葡萄素的洗脱液，用等体积蒸馏水稀释后，室温下挥发洗脱液中的甲醇至开始出现结晶时，降温至2-6℃，静置、完成结晶后，离心分离，得到纯度≥98%的ε-葡萄素单体；所述羟丙基葡聚糖凝胶柱的型号为LH-20；洗脱液用量为？-？BV，洗脱液的流速为1-2BV/h。

6.根据权利要求1所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于，所述含有白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物是通过下述步骤制备的：

步骤a 提取

按液固比为4-6mL/g的比例，将含ε-葡萄素的植物破碎至-20目后加入提取剂中，在20-60℃提取0.5-1h后，得到提取液；所述提取剂由水和有机溶剂按体积比为水：有机溶剂=3-5:15-17组成，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、乙酸乙酯中的一种；

步骤b纯化

以3000-5000r/min的离心速度对步骤a所得提取液进行离心分离，得到的上清液用大孔树脂进行层析纯化，层析时先用水洗脱，然后用乙醇溶液洗脱；收集乙醇洗脱液，于50-60℃，浓缩、干燥得到含有白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物；或

将步骤a所得提取液，在60℃以下除去其中的有机溶剂后，向其中加入等体积的萃取剂进行萃取，萃取结束后，取有机相于40-60℃浓缩、干燥，得到含有白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物；萃取剂的选择制度为：当提取剂中有机溶剂为乙醇或甲醇时，所用萃取剂为乙酸乙酯；当提取剂中有机溶剂为乙酸乙酯时，所用萃取剂为氯仿或二氯甲烷。

7.根据权利要求6所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：所述含ε-葡萄素的植物为葡萄枝蔓；所述葡萄枝蔓经自然阴干1-3月。

8.根据权利要求6所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：所述提取为超声提取或回流提取。

9.根据权利要求6所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：步骤b中所述大孔树脂选自D101型大孔树脂、AB-8型大孔树脂、D102型大孔树脂中的一种。

10.根据权利要求6所述的一种从葡萄枝蔓中提取高纯度ε-葡萄素的方法，其特征在于：步骤b中，层析纯化时，控制上样速度为2-3BV/h；上样完成后，先用1-3BV的水进行洗脱，然后用2-6BV的乙醇进行洗脱并收集乙醇洗脱液；乙醇洗脱液在50-60℃减压浓缩至浸膏状后进行真空干燥，得到含有白藜芦醇和ε-葡萄素的固体混合物；所述乙醇的体积百分浓度为70-90%。