[发明专利]一种将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的诱导剂、诱导培养基及方法

权利要求书

1.一种将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的诱导剂，其特征在于：由以下组分组成：大株红景天注射液、烟酰胺、牛磺酸和GLP-1。

2.根据权利要求1所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的诱导剂，其特征在于：各组分的质量浓度配比为：大株红景天注射液20～40 g/L、烟酰胺0.97～1.47g/L、牛磺酸0.25～0.50 g/L，GLP-1 26.84～40.27mg/L。

3.一种含有如权利要求1或2所述的诱导剂的诱导培养基，其特征在于：所述诱导培养基通过以下方法制备而成：每1000ml所述诱导培养基中含有大株红景天注射液20～40 g、烟酰胺0.97～1.47g、牛磺酸0.25～0.50 g、GLP-1 26.84～40.27mg，余量为人间充质干细胞无血清培养基，混匀过滤除菌即可。

4.一种将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，该方法包括以下步骤：

（1）、脂肪间充质干细胞的制备：将脂肪组织消化后，进行原代细胞培养、传代培养；

（2）、脂肪间充质干细胞的鉴定：取P3代脂肪间充质干细胞，流式检测细胞表面标记；

（3）、诱导人脂肪间充质干细胞分化为胰岛细胞：传3代的脂肪间充质干细胞，0.125%～0.01％Trypsin-EDTA溶液消化收集细胞，制备细胞悬液，细胞计数板计数活细胞密度，并调整密度1×10⁴/cm²，接种于事先放置有经多聚赖氨酸处理的消毒盖玻片的24孔板内，制备细胞爬片；待细胞达接近80%融合，生长旺盛时用诱导剂进行诱导分化；

（4）、诱导后胰岛细胞鉴定。

5.根据权利要求4所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：步骤（4）所述的诱导后胰岛细胞鉴定方法为：双硫腙染色反应。

6.根据权利要求4所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：步骤（4）所述的诱导后胰岛细胞鉴定方法为：化学发光免疫分析法检测胰岛素水平。

7.根据权利要求4所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：步骤（4）所述的诱导后胰岛细胞鉴定方法为：采用ELISA试剂盒检测诱导获得的胰岛样细胞是否具有胰岛素分泌功能。

8.根据权利要求4所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：步骤（4）所述的诱导后胰岛细胞鉴定方法为：葡萄糖刺激实验。

9.根据权利要求4所述的将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的方法，其特征在于：步骤（4）所述的诱导后胰岛细胞鉴定方法为：动物模型体内移植实验。