[发明专利]利用核糖体DNA序列构建核苷酸分子式鉴定植物品种的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种鉴定或辅助鉴定植物品种的方法，特别涉及一种利用核糖体DNA序列构建核苷酸分子式鉴定植物品种的方法。

背景技术

植物品种是指经过人工选育而形成的种性基本一致、遗传性比较稳定、具有人类需要的某些经济性状：如观赏性状、药用性状或其它经济性状，作为特殊生产资料用的栽培植物群体。如牡丹品种、核桃品种、苹果品种、紫薇品种等。

植物品种一般利用表型性状进行鉴定和识别。但是，植物品种在特征表现上存在季节差异，在有的季节可能表现不出品种间有差异的性状。例如，紫薇品种通常按照花型、花色和花期进行分类，花期以外的时间存在品种鉴定难的问题。

品种的准确鉴定和纯度分析一直是经济植物和资源植物（如花卉）产业发展上的重要课题。在规模化生产领域，以某种具体植物品种为生产资料和/或产品进行大规模生产的企业等，需要借助灵敏度高的DNA分子分形检测技术进行精确鉴定和分析。

紫薇是千屈菜科Lythraceae紫薇属Lagerstroemia L.的灌木或乔木。紫薇属植物在全球共有约55种，分布于亚洲东部、东南部和南部的热带、亚热带地区、新几内亚岛、菲律宾以及澳大利亚等地，具有较宽的生态适应性。中国目前原生的紫薇属植物有19种，引入栽培4种，一共23种。紫薇具有吸收SO₂等工业污染气体、降尘及消除雾霾等生态作用，是重要环保树种、资源植物和城市绿化花木。人工杂交和选育优良特用紫薇品种是重要研究方向之一。紫薇是炎热夏季花期最长的重要观赏花木之一，在中国已报道有100多个紫薇园艺栽培品种。然而，由于品种资源缺乏整理，限制了紫薇品种的生产、推广和育种。传统紫薇品种的来源记载不详、存在同物异名和异物同名现象等，导致了市场的不规范，影响了紫薇花木的正常交易和相关产业经济规模的增长。形态标记和DNA分子标记的不足以及缺乏可靠的鉴定技术体系严重制约着紫薇种质资源的遗传评价、保护与利用。为了适应国内和国际市场需求，迫切需要品种鉴定的标准化、规范化和科学化。

在细胞核基因组内，核糖体DNA是编码核糖体RNA的基因。核基因组核糖体DNA内转录间隔区（nuclear ribosomal internal transcribed spacer，简称nrITS）是指生物的细胞核基因组上编码核糖体小亚基的18S rRNA基因和编码核糖体大亚基的26S rRNA基因之间的间隔区。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种鉴定或辅助鉴定待测紫薇品种的方法。

本发明所提供的鉴定或辅助鉴定待测紫薇品种的方法，是利用核糖体DNA序列中一段含有细胞核ITS区和部分26S rRNA基因区域的变异位点构建核苷酸分子式进而鉴定或辅助鉴定待测紫薇品种的方法，具体包括如下步骤：

（1）以待测紫薇的基因组DNA为模板，用由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR产物；

（2）将所述PCR产物测序，根据测序结果列出所述待测紫薇的核苷酸分子式；

所述待测紫薇的核苷酸分子式的通式为：

B₁₅B₁₆B₉₉B₁₀₂B₃₃₉B₃₄₆B₄₆₇；

在所述通式中，所述B₁₅、所述B₁₆、所述B₉₉、所述B₁₀₂、所述B₃₃₉、所述B₃₄₆和所述B₄₆₇，依次表示在所述PCR产物的核苷酸序列中，将所述PCR产物的核苷酸序列自5’端的第126个碱基记为第1个碱基，沿着所述PCR产物的核苷酸序列向3’端方向顺次计数的第15、16、99、102、339、346和467个碱基；

在所述通式中，每一个B为A、T、C和G四种碱基中的一种或两种的叠加；

（3）将步骤（2）所得所述待测紫薇的核苷酸分子式与核苷酸分子式组I进行比对；

所述核苷酸分子式组I由如下a1）-a10）共10种核苷酸分子式组成：