[发明专利]鹿角炭角菌的简易快速分离纯化培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种鹿角炭角菌的简易快速分离纯化培养方法，属于生物技术领域，具体地说是属于特殊真菌室内培养范畴。

背景技术

鹿角炭角菌[Xylaria hypoxylon (L.) Grev.]属于粪壳菌纲(Sordariomycetes)、 炭角菌亚纲(Xylariomycetidae)、子囊菌亚门(Ascomycotina)、炭角菌目(Xylariales)、炭角菌科(Xylariaceae)、炭角菌属(Xylaria)。其子座小或中型，高4.5～10.5cm，粗3～6mm，顶部渐细，分枝较多，呈鹿角状，基部柱形，有细绒毛，污白色、乳白色，后期呈黑色；子囊壳黑色，子囊130～170μm×8～10μm，子囊孢子8个，光滑，无隔，13～17μm×6～8μm。鹿角炭角菌为大陆记录新种，资料报道不多，涉及生物学特性等的研究极少。

炭角菌属的真菌，是生长于白蚁废巢上的一类重要寄生性指示菌，具有较高的药用价值，如长柄炭角菌（Xylaria longipes Nitschke）发酵液中已分离到具有很强抗真菌活性的xylaramide化合物、抗氧化活性的tyrosol和2，5-二羟基呋喃。刘庆洪等研究得出，1mg/mL的鹿角炭角菌多糖复合物对HIV逆转录酶活性的抑制率为80.4±1.2%，鹿角炭角菌代谢产物具有免疫调节活性。目前研究较多的是黑柄炭角菌[Xylaria nigripes(Kl.)Sacc.]，其具有以下功能：①镇静安眠、增加脑内能量储存，可适用于神经官能症、植物性神经紊乱、多种焦虑抑郁状态、神经性头痛、偏头痛等；②菌丝粗多糖可改善免疫系统的功能，明显提高机体的免疫能力；③具有抗前列腺增生作用，能治疗前列腺增生并改善症状；④能提高贫血动物的造血功能等。

炭角菌属真菌价值大，但由于生境特殊，资源非常稀少，一般要等白蚁死后，在废弃的白蚁巢穴上才会长出，生长周期一般5～8天，时间短，要遇到或采集到合适的子实体很难，这也给菌种分离及纯培养带来了一定的难度，因此目前炭角菌属的纯培养物种极少，另外极其有限的资源也使其深度研究、开发利用难以进行。

本发明在鸡枞菌的人工培养研究过程中偶然发现，直接利用活蚁巢培养炭角菌是一种很好很简单很快速的培养方法。利用这种方法，可以在短时间内培养出大量的炭角菌子实体，但因子实体周期短，一个蚁巢上长出的子实体有限，有必要进行纯培养研究。利用本发明产生的子实体干净、健壮，很容易得到纯培养菌丝。这为今后炭角菌的较大规模人工培养、可持续性的研究及开发利用等提供了较好的思路及方法。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种简易、快速、成功率高的炭角菌分离纯化方法。

本发明的技术任务是，室内土埋活蚁巢，以快速大量生长炭角菌，利用炭角菌子实体，进行分离纯化培养；

所述室内土埋活蚁巢的方法及步骤为：在野外有鸡枞菌生长的地方，挖取活蚁巢，将长有大量白蚁的较完整蚁巢装于黑色塑料袋中，带回室内，放置于黑暗条件下；准备长、宽、高为40*20*25cm的长方体玻璃鱼缸，先在缸中加入3～5cm从野外带回的巢土；待第5～7天，塑料袋中白蚁大量死亡，还活有1/6～1/4，巢上长出大量灰白色菌丝时，将其轻置于缸中，上面再覆6～8cm巢土，喷水至土表湿透；2～4天后，土表即长出很多白色、细棒状、少分枝的炭角菌，第6～8天，分枝增多，基部增粗、增高，炭角菌子实体成熟；

所述分离纯化培养方法为：将生长于土表上成熟的炭角菌子实体轻轻用消毒的镊子取下，无菌条件下先在75%酒精中浸蘸15～20秒，再在无菌水中涮10～15秒，用无菌滤纸吸干水，切成3～4个小段，每段分开接种于含诱导培养基的培养皿中，其所述的诱导培养基成份为：马铃薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、MgSO₄1.00g/L、14.5～16.0波美的麦芽汁130～150ml、琼脂12.00g/L，控制PH值为5.0～5.2，培养温度为22～24℃，暗培养5～7天，培养皿表面长出大量灰白色菌丝，6～8天转接一次，转接4～6次，即得到纯的菌丝体；将菌丝体转入含固体培养基的500ml三角瓶中，10～15天即会长出炭角菌子实体，其所述的固体培养基成分为：马铃薯200.00g/L、葡萄糖20.00g/L、巢土20～30g/L、14.5～16.0波美的麦芽汁130～150ml、琼脂12.00g/L，控制PH值为5.0～5.2。